其他(磁弹性生物传感器) 2009

Wireless, remote-query, and high sensitivity Escherichia coli O157:H7 biosensor based on the recognition action of concanavalin A.

Analytical chemistry Lu Q, Lin H, Ge S, Luo S, Cai Q, Grimes CA
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组成图示

Wireless, remote-query, and high sens... 传感器构成示意图

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传感器类型

其他(磁弹性生物传感器)

检测对象

大肠杆菌 O157:H7(Escherichia coli O157:H7),样品基质:水/营养肉汤(CM)样品,实际检测以水为介质

检测原理

传感器以 Metglas 2826 磁弹性厚膜为换能器,表面经 Bayhydrol 110 聚氨酯膜和羧基化甘露糖修饰。检测时,Con A 同时结合表面甘露糖与大肠杆菌 O157:H7 表面 LPS/O-抗原中的葡萄糖受体,形成多价桥接,使细菌牢固附着于传感器表面。细菌质量负载增加导致磁弹性膜有效质量增大,共振频率下降;Mn2+/Ca2+(约0.3 mM)结合 Con A 并促进糖结合,增强频率偏移。外部时变磁场激励传感器振动,回磁信号由拾取线圈远程接收,读取器以频率计数方式输出 Δf。3 h 频率偏移与菌体浓度对数呈线性,从而实现定量检测。

检测灵敏度

LOD: 60 cells/mL;线性范围: 6.0 × 10^1–6.1 × 10^9 cells/mL(对数线性)

效应效果

该传感器无需孵育,3 h 内完成定量,LOD 为 60 cells/mL,优于 MEMS 安培 DNA 杂交(1000 cells)、QCM 糖/凝集素识别(7.5×10^2 cells/mL)、纳米颗粒放大 QCM DNA(2.67×10^2 cells/mL)及基于生长曲线的磁弹性方法(200 cells/mL),但高于 PCR-CE(2–3 cells)。Con A 对革兰氏阴性菌表面 LPS 的识别赋予方法较高特异性;Mn2+/Ca2+ 在 0.3 mM 时增强响应,过高则抑制细菌生长并降低响应。营养肉汤中大分子会部分阻塞表面,水介质响应更强。作者认为无线、无源、远程查询特性适合无菌环境微生物快速分析。

传感器的构成

  • 基底/换能器:Metglas 2826 非晶合金厚膜(Fe40Ni38Mo4B18),磁弹性换能器,外部磁场下机械振动产生共振频率。
  • 保护膜/功能化基底:Bayhydrol 110 脂肪族聚酯聚氨酯树脂(1 µm,40% 涂覆,150 °C 2 h),保护富铁基底并提供 NH 基团用于连接甘露糖。
  • 识别/捕获层:羧基化甘露糖(carboxyl functionalized mannose),通过 EDC/NHS 与聚氨酯 NH 形成酰胺键,提供甘露糖配体。
  • 识别桥接元件:刀豆蛋白 A(Con A),多价结合甘露糖和 E. coli 表面 O-抗原/葡萄糖受体,桥接细菌。
  • 被测物:E. coli O157:H7,表面 LPS/O-抗原与 Con A 结合,质量负载。
  • 信号增强离子:Mn2+/Ca2+(1:1,约0.3 mM),结合 Con A 促进糖结合。
  • 读出系统:磁弹性传感器读取器/拾取线圈与 RS232 计算机,检测共振频率变化。

中文摘要

大肠杆菌 O157:H7 是一种可污染食品并引起食物中毒、尿路感染、炎症和腹膜炎的致病菌,快速准确的细菌检测方法对食品安全和水污染控制至关重要。本文报道一种无线、远程查询、无源磁弹性生物传感器,用于直接检测 E. coli O157:H7。传感器以 Metglas 2826 非晶合金厚膜为换能器,表面先涂覆约 1 µm 的 Bayhydrol 110 聚氨酯保护膜,再通过 EDC/NHS 将羧基化甘露糖连接至表面。检测时,刀豆蛋白 A(Con A)同时结合表面甘露糖和细菌表面 O-抗原/LPS 中的葡萄糖受体,形成多价桥接,使细菌牢固附着。细菌质量负载引起共振频率偏移,从而实现定量。该方法无需孵育,3 h 内完成,检出限为 60 cells/mL,对数线性范围为 6.0×10^1–6.1×10^9 cells/mL。

英文摘要

Escherichia coli O157:H7 is detected using a remote-query (wireless, passive) magnetoelastic sensor platform to which a 1 microm thick layer of Bayhydrol 110 and then a layer of functionalized mannose is applied. The multivalent binding of lectin concanavalin A (Con A) to the E. coli surface O-antigen and mannose favors the strong adhesion of E. coli to the mannose-modified magnetoelastic sensor; E. coli is rigidly and strongly attached on the mannose-modified sensor through Con A, which works as a bridge to bind E. coli to the mannose-modified sensor surface. As E. coli is bound to the sensor, its resonance frequency shifts, enabling quantification of E. coli concentration with a limit of detection of 60 cells/mL and a linear logarithmic response range of 6.0 x 10(1) to 6.1 x 10(9) cells/mL. The analysis can be directly conducted without incubation and completed in 3 h or less.

关键词

大肠杆菌O157:H7磁弹性生物传感器刀豆蛋白A甘露糖无线传感共振频率