组成图示
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传感器类型
电化学发光(ECL)生物传感器
检测对象
凝血酶（thrombin）；样品基质为Tris-HCl缓冲液（pH 7.4），未报道血清、血浆等实际样品。
检测原理
将15碱基抗凝血酶适配体拆分为捕获探针和检测探针。捕获探针经硫醇端Au–S键固定于金电极，检测探针3'端标记Ru-SNPs。无凝血酶时，两探针间相互作用弱，检测探针可被洗脱，电极表面几乎无ECL标记，背景低。加入凝血酶后，凝血酶同时结合两个适配体片段，诱导其结合并形成G-四链体结构，使带Ru-SNPs的检测探针稳定富集于电极表面。在CV扫描下，Ru(bpy)3^2+在约1.20 V被电化学氧化，与DBAE发生共反应产生ECL；凝血酶浓度越高，电极表面Ru-SNPs越多，ECL强度越大，实现signal-on检测。Ru-SNPs提供纳米级信号放大。
检测灵敏度
LOD: 2.0 × 10^-13 mol L^-1；线性范围: 3.3 × 10^-13–3.3 × 10^-11 mol L^-1；斜率: 185.54；回归方程: I/a.u.= 185.54 logC + 2387.97；R = 0.9986
效应效果
该传感器在连续CV扫描下对3.3×10^-11 mol/L凝血酶的ECL响应RSD为5.2%（n=6），6个不同修饰电极间RSD为5.8%，4℃保存数周后ECL信号仅降低5%，表明重现性和稳定性良好。选择性方面，BSA、BHb和IgG浓度均为5.0×10^-8 mol/L，远高于凝血酶浓度3.3×10^-11 mol/L，但ECL信号明显低于凝血酶响应，说明干扰可忽略。与已有凝血酶ECL适配体传感器相比，其检出限更低，且因引入凝血酶前体系中无ECL标记而背景信号低。作者认为该分裂适配体策略易于构建，可扩展至其他小分子或蛋白检测。
传感器的构成
- 基底/换能器电极：金电极（Au electrode），作为ECL信号换能器与探针固定基底。
- 识别元件（捕获探针）：5'-硫醇修饰抗凝血酶适配体片段（capture probe），通过Au–S键固定于金电极并识别凝血酶。
- 识别元件（检测探针）：3'-酰胺连接Ru-SNPs标记的抗凝血酶适配体片段（detection probe），在凝血酶存在下与捕获探针结合。
- 信号标记物：Ru(bpy)3^2+掺杂二氧化硅纳米粒子（Ru-SNPs），作为ECL发光标记并提供信号放大。
- 共反应试剂：2-(二丁氨基)乙醇（DBAE），在ECL体系中作为共反应剂增强Ru(bpy)3^2+发光。
- 检测介质：Tris-HCl缓冲液（pH 7.4），维持反应环境并提供ECL测量介质。
中文摘要
本文报道了一种基于目标诱导分裂适配体片段结合的高灵敏、高选择性电化学发光（ECL）生物传感器，用于检测凝血酶。将15碱基抗凝血酶DNA适配体拆分为捕获探针和检测探针：捕获探针5'端修饰硫醇，通过Au–S键固定于金电极；检测探针3'端标记Ru(bpy)3^2+掺杂二氧化硅纳米粒子（Ru-SNPs）。无凝血酶时，两探针主要解离，带ECL标记的检测探针可被洗脱，背景信号低；存在凝血酶时，两探针与凝血酶结合形成G-四链体结构，使Ru-SNPs富集于电极表面，ECL信号增强。在含5×10^-3 mol/L DBAE的Tris-HCl（pH 7.4）中，ECL强度与凝血酶浓度对数在3.3×10^-13–3.3×10^-11 mol/L呈线性，检出限2.0×10^-13 mol/L。传感器重现性好（RSD 5.2%和5.8%），4℃保存数周信号仅降低5%，对BSA、BHb、IgG等干扰物选择性良好。
英文摘要
A highly sensitive and selective electrochemiluminescence biosensor for detection of thrombin based on the strategy of target-induced conjunction of split aptamer fragments was developed.