组成图示
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传感器类型
综述或非传感器论文
检测对象
caspase-3 激活（caspase-3 activation）、凋亡诱导活性（apoptosis-inducing activity）；样品基质：HeLa-C3 细胞培养体系（96孔板细胞培养液）
检测原理
化合物处理HeLa-C3细胞后诱导凋亡通路，使细胞内caspase-3被激活。激活的caspase-3识别并切割FRET传感器连接肽中的DEVD序列，导致CFP供体与YFP受体分离，FRET效率下降。正常细胞中CFP激发能量转移至YFP，YFP/CFP发射比通常为6–8；凋亡发生时比值降至≤3。酶标仪以440 nm激发，分别测量486 nm CFP和535 nm YFP发射，计算YFP/CFP比值。化合物浓度越高或作用时间越长，caspase-3激活越明显，比值下降越显著。
检测灵敏度
原文未报告 LOD、线性范围、灵敏度斜率或 R^2；阳性阈值：YFP/CFP emission ratio ≤ 3；正常细胞比值 6–8；测试浓度：25、50、100 µM。
效应效果
在72 h内，化合物1、3–9在≤100 µM时使YFP/CFP发射比降至≤3，提示caspase-3激活；6、8、9在25 µM即强促凋亡，1、4、7在50 µM阳性，3在100 µM阳性，5在100 µM阳性、50 µM比值3.3。化合物2和10无caspase-3依赖凋亡，2可能caspase非依赖，9高浓度可致死而不激活caspase-3。形态学见细胞皱缩脱落，与paclitaxel 500 nM一致。MTT IC50：1 17.5±0.7、2 23.0±2.6、3 14.3±0.2、4 14.9±2.6、5 12.4±2.4 µM。实验三重复。未报告选择性、稳定性、回收率及方法对比。
传感器的构成
- 细胞基底：HeLa-C3 基因工程细胞，作为完整活细胞传感平台，表达 caspase-3 荧光传感器
- 识别元件：caspase-3 酶，凋亡过程中被激活并识别切割传感器中的 DEVD 序列
- 传感肽：DEVD 切割序列，连接 CFP 与 YFP，被 caspase-3 切割后解除 FRET
- 荧光标记物：CFP 供体与 YFP 受体，通过 FRET 产生绿色荧光，切割后 CFP 蓝色荧光增强
- 读出装置：Perkin-Elmer Victor 酶标仪，440 nm 激发，分别检测 486 nm CFP 与 535 nm YFP 发射并计算 YFP/CFP 比值
中文摘要
通过生物活性导向分离，从多花藤黄果（Garcinia multiflora）枝条丙酮提取物中分离得到5个新的多异戊烯基化苯甲酰三羟苯基甲烷衍生物：garcimultiflorone D（1）、18-羟基garcimultiflorone D（2）、garcimultiflorone E（3）、garcimultiflorone F（4）和isogarcimultiflorone F（5），以及5个已知化合物：guttiferone E（6）、guttiferone F（7）、aristophenone A（8）、isoxanthochymol（9）和morelloflavone（10）。利用能检测caspase-3激活的荧光生物传感器HeLa-C3细胞评估其凋亡诱导活性。结果表明，化合物1和3–9在72 h内、浓度≤100 µM时可激活caspase-3；其中6、8和9在25 µM即表现出强促凋亡作用。化合物2和10未显示caspase-3依赖的凋亡诱导效应。
英文摘要
With bioassay-guided fractionation, five new polyprenylated benzoylphloroglucinol derivatives, garcimultiflorone D (1), 18-hydroxygarcimultiflorone D (2), garcimultiflorone E (3), garcimultiflorone F (4), and isogarcimultiflorone F (5), and five known compounds, guttiferone E (6), guttiferone F (7), aristophenone A (8), isoxanthochymol (9), and morelloflavone (10), were isolated from the acetone extract of the twigs of Garcinia multiflora. The compounds were evaluated for their apoptotic effects against HeLa-C3 cells, which have been genetically engineered to produce a fluorescent biosensor capable of detecting caspase-3 activation. Compounds 1 and 3-9 activate caspase-3 in HeLa-C3 cells within 72 h after treatment at a concentration of 100 microM or lower. In particular, compounds 6, 8, and 9 showed strong apoptosis-inducing effects at a concentration of 25 microM.