组成图示
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传感器类型
其他（PEIA-椭偏仪免疫传感）
检测对象
白介素-6（IL-6，重组人 IL-6）、抗 IL-6 抗体（anti-IL6.16、anti-IL6.8），样品基质为 Tris 缓冲液/溶液
检测原理
PEIA-椭偏仪法将抗 IL-6 抗体点涂于硅片，先让 IL-6 与抗体在溶液中达到结合平衡，再把硅片插入混合液，使未结合 IL-6 及 IL-6/抗体复合物被表面抗体捕获。随后用生物素化抗 IL-6 抗体标记已吸附 IL-6，再结合链霉亲和素-多聚 HRP；HRP 在沉淀缓冲液中催化形成沉淀，使表面质量显著增加。椭偏仪通过偏振器与分析器角度变化实时读出沉淀量，经标准曲线换算为自由 IL-6 浓度，再用 Langmuir 方程拟合 Kd。SPR 法则将抗体共价固定于 CM5 芯片，IL-6 流过时表面质量变化引起共振单位（RU）变化；但高亲和体系平衡慢且固定化可产生低亲和群体。
检测灵敏度
未报告 LOD、线性范围、灵敏度斜率或相关系数。
效应效果
PEIA-椭偏仪法与生物测定一致：anti-IL6.16 平衡 Kd 47±10 pM，anti-IL6.8 3.7±0.8 pM；动力学 Kd 51（40–62）pM 和 6.2（4.5–7.1）pM。SPR 在 1 nM 以下 4 h 未达平衡，仅估计 Kd <400 pM 和 <200 pM；动力学显示固定化后出现低亲和群体，Kd 约 500（400–1200）pM 和 700（600–1100）pM。方法用 NFDM/Tween 20 抑制非特异结合，SPR 用转铁素阴性对照，作者认为 PEIA-椭偏仪适合皮摩尔级高亲和结合常数测定。
传感器的构成
- 基底/换能器：Delbia NW1 硅片（silicon slides），用于椭偏仪实时监测表面质量与偏振变化
- 封闭层：无脂奶粉（NFDM）或 Tween 20，抑制非特异蛋白吸附
- 识别元件：抗 IL-6 单克隆抗体 anti-IL6.16 或 anti-IL6.8，点涂于硅片以捕获 IL-6
- 信号标记物：抗 IL-6.8/生物素偶联物（anti-IL6.8/biotin conjugate）或生物素化多克隆抗 IL-6 抗体，标记已吸附 IL-6
- 信号放大元件：链霉亲和素-多聚辣根过氧化物酶（streptavidin-Poly HRP），结合生物素并催化沉淀
- 沉淀底物：HRP 沉淀缓冲液（precipitation buffer），在 HRP 催化下形成沉淀以增强表面质量
- 读出装置：椭偏仪（ellipsometer），通过偏振器 P 与分析器 A 的角度变化定量沉淀/表面质量
中文摘要
高亲和抗体–抗原结合参数的测定对治疗性抗体筛选、牛体内激素检测及临床免疫分析很重要。无标记测定常将一种结合伙伴固定在生物传感器芯片上，再监测另一伙伴的结合平衡；但当解离常数达皮摩尔或更低时，平衡时间过长，只能分析吸附/解离动力学。本文评估一种新方法：沉淀增强免疫检测–椭偏仪（PEIA-ellipsometry），利用溶液中结合平衡比固相表面更快建立的特点，通过抗体点涂硅片捕获未结合抗原，并用 HRP 催化沉淀放大信号，测定两种高亲和抗白介素-6 抗体 anti-IL6.16 和 anti-IL6.8 的结合参数，并与基于 IL-6 依赖细胞生长的生物测定及标准 SPR 技术比较。生物测定得到 anti-IL6.8 和 anti-IL6.16 的高亲和值分别为 5 和 50 pM，PEIA-椭偏仪可方便测得；SPR 平衡测量耗时过长，动力学分析显示抗体固定于芯片后出现不同亲和性群体。
英文摘要
Assessment of high-affinity antibody-antigen binding parameters is important in such diverse areas as selection of therapeutic antibodies, detection of unwanted hormones in cattle and sensitive immunoassays in clinical chemistry. Label-free assessment of binding affinities is often carried out by immobilization of one of the binding partners on a biosensor chip, followed by monitoring the binding equilibrium of the other partner. However, for the measurement of high-affinity binding, with dissociation constants in the picomolar range or lower, equilibration times exceed practical limits and one has to resort to the measurement of sorption kinetics. Here we evaluate a new technique, using PEIA(1)-ellipsometry and establishment of equilibrium in solution. Binding parameters are determined for two high-affinity anti-interleukin 6 antibodies, anti-IL6.16 and anti-IL6.8, and compared with values obtained by a bioassay, based on IL6-dependent cell growth, and with values obtained by a standard technique based on SPR.(2) The high affinities of both antibodies as found with the bioassay (5 and 50pM for anti-IL6.8 and anti-IL6.16, respectively), could be conveniently measured by PEIA-ellipsometry. Using SPR, equilibrium measurements indeed proved too time-consuming and analysis of adsorption/desorption kinetics revealed that the binding of the antibodies on the chip caused the appearance of different populations of antibodies with different affinities.