电化学生物传感器 2011

A selective novel non-enzyme glucose amperometric biosensor based on lectin-sugar binding on thionine modified electrode.

Biosensors & bioelectronics Li F, Feng Y, Yang L, Li L, Tang C, Tang B
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组成图示

A selective novel non-enzyme glucose ... 传感器构成示意图

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传感器类型

电化学生物传感器

检测对象

D-葡萄糖(d-Glucose);样品基质:血清(200倍稀释)、PBS缓冲液

检测原理

该传感器以玻碳电极为基底,硫堇(TH)共价固定于活化表面并作为电化学指示剂,聚多巴胺(pDA)膜将刀豆蛋白A(Con A)稳定固定。检测时,D-葡萄糖与Con A的糖结合位点特异性结合,使Con A构象/界面状态改变,增加TH与电极之间的电子转移阻力,导致TH氧化峰电流下降。通过循环伏安(CV)、差分脉冲伏安(DPV)或电化学阻抗谱(EIS)监测TH氧化电流或电子转移电阻变化,即可反映葡萄糖浓度。该过程不依赖葡萄糖直接电化学氧化,也没有HCR、RCA等额外放大步骤,主要依靠Con A高亲和识别和TH良好电子转移实现检测。

检测灵敏度

LOD: 7.5 × 10−7 M;线性范围: 1.0 × 10−6–1.0 × 10−4 M;回归方程: ΔIpa (10−6 A) = −0.04279 C (10−6 M) −0.42308;相关系数: −0.9969

效应效果

该传感器对1.0×10−4 M尿酸(UA)和抗坏血酸(AA)无观察干扰,选择性良好。重现性方面,11次连续测定相对标准偏差(RSD)为3.1%,6个独立制备传感器RSD为3.8%;每3天检测4.0×10−6 M葡萄糖,2个月后保留91%初始响应。三份新鲜血清稀释200倍后标准加入4.0×10−5 M葡萄糖,回收率为97.8–104.3%。与Cu/CNTs/GCE、Cu2O/MWCNT等非酶电化学葡萄糖传感器相比性能可比;与基于Con A的SPR或荧光传感器相比灵敏度较低,但首次实现Con A-葡萄糖结合的安培检测。作者认为其可用于稀释后实际样品分析,具有临床血糖检测潜力。

传感器的构成

  • 基底/换能器电极:玻碳电极(GCE),经0.1 M HNO3恒电位活化生成表面-CHO/微孔结构,提供电子转底材
  • 信号标记层:硫堇(TH),通过席夫碱反应共价固定于活化GCE,作为电化学氧化还原指示剂
  • 黏附修饰层:聚多巴胺(pDA),由多巴胺(DA)在碱性PBS中自聚合形成,附着于TH表面并提供结合位点
  • 识别元件:刀豆蛋白A(Con A),通过Michael加成和/或席夫碱反应固定于pDA,特异性识别D-葡萄糖
  • 信号读出:三电极体系(Ag/AgCl参比、铂丝辅助)与电化学分析仪,通过CV/DPV/EIS监测TH氧化电流变化

中文摘要

本文报道了一种基于刀豆蛋白A(Con A)与D-葡萄糖生物特异性结合的新型非酶葡萄糖安培生物传感器。硫堇(TH)通过席夫碱反应共价固定于恒电位活化的玻碳电极(GCE)表面,作为电化学响应指示剂。随后,多巴胺(DA)在碱性条件下自聚合成表面黏附的聚多巴胺(pDA)膜,附着于TH层,并通过Michael加成和/或席夫碱反应为Con A提供稳定固定位点,从而构建D-葡萄糖特异性检测平台。Con A与D-葡萄糖的结合可通过TH部分电极响应降低来监测。由于Con A对D-葡萄糖的高亲和力和传感平台的高稳定性,所制备生物传感器表现出高选择性、良好灵敏度,对D-葡萄糖的线性范围为1.0×10−6至1.0×10−4 M,检出限为7.5×10−7 M。

英文摘要

A novel non-enzyme glucose amperometric biosensor was fabricated based on biospecific binding affinity of concanavalin A (Con A) for D-glucose on thionine (TH) modified electrode. TH can be covalently immobilized on potentiostatically activated glassy carbon electrode through Schiff-base reaction. Subsequently, the surface-adherent polydopamine film formed by self-polymerization of dopamine attached to TH and afforded binding sites for the subsequent immobilization of Con A molecules via Michael addition and/or Schiff-base reaction with high stability. Thus, a sensing platform for specific detection towards D-glucose was established. The binding of Con A towards D-glucose can be monitored through the decrease of the electrode response of the TH moiety. Due to the high affinity of Con A for D-glucose and high stability of the resulting sensing platform, the fabricated biosensor exhibited high selectivity, good sensitivity, and wide linear range from 1.0×10(-6) to 1.0×10(-4) M with a low detection limit of 7.5×10(-7) M towards D-glucose.