组成图示
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传感器类型
综述或非传感器论文
检测对象
纤溶酶原（plasminogen, Glu-plasminogen/Lys-plasminogen）、B11肽（FEKDKYILQGVTSWGLG）、组织型纤溶酶原激活物（t-PA）；样品基质：磷酸盐缓冲液、人/小鼠血浆或血栓模型血液
检测原理
SP 与 Glu-纤溶酶原 B 区结合，关键残基 Asp750 与 SP 中 Lys14 可能通过静电作用识别，诱导纤溶酶原局部构象变化，使 t-PA 更易接近切割位点，降低 Km 并提高 kcat/Km。在 IAsys 共振镜生物传感器中，SP 或纤溶酶原共价固定于羧甲基葡聚糖涂层芯片，溶液相结合物结合后改变界面质量/折射率，引起共振响应（arc seconds）变化，实时获得结合与解离动力学。比色法中，t-PA 将纤溶酶原转化为纤溶酶，纤溶酶水解 S-2251 释放 p-硝基苯胺，405 nm 吸光度随纤溶酶生成量增加，从而反映激活效率。
检测灵敏度
原文未报告 LOD、线性范围、灵敏度斜率或相关系数。
效应效果
SP 选择性增强 t-PA 对 Glu-纤溶酶原激活，不增强 Lys-纤溶酶原激活，也不改变纤溶酶活性；37°C 缓冲液 7 天保留 >80% 活性，与 plasmin-Sepharose 或 t-PA-Sepharose 孵育 1 h 后活性完全保留。B11 肽抑制 SP 介导激活，D750A/D750K/DD750 突变显著降低抑制活性，提示 Asp750 关键。小鼠颈动脉血栓模型中，SP 剂量依赖促进再通：62.5、125、250 μg/kg 再通时间分别为 2.38±1.11、9.25±2.12、13.45±6.14 min，对照 0.67±0.55 min；t-PA 基因缺失小鼠无再通，PAI-1 缺失小鼠再通更早。SP 不引起血浆纤维蛋白原降解，作者认为其可作为 t-PA 替代或增效剂。
传感器的构成
- 基底/换能器：IAsys 共振镜生物传感器芯片，提供光学共振检测界面
- 修饰层：活化羧甲基葡聚糖涂层（carboxymethyl dextran-coated cuvette），用于共价偶联蛋白或肽
- 识别元件：固定化 SP 或 Glu-plasminogen/t-PA/u-PA，作为结合分析配体
- 目标物：溶液相 Glu-plasminogen、B11 肽或内皮细胞，用于检测结合
- 信号读出：共振响应（arc seconds）随界面结合质量/折射率变化而改变
中文摘要
背景：此前发现一种源自葡萄球菌激酶（SAK）的合成十九肽 SP（GPYLMVNVTGVDGKGNELL）可增强 SAK/纤溶酶复合物对纤溶酶原的激活。目的：鉴定 SP 在纤溶酶原上的结合位点，并阐明 SP 对组织型纤溶酶原激活物（t-PA）激活纤溶酶原的影响。方法：采用比色底物法和还原条件 SDS-PAGE 检测纤溶酶原激活；用 IAsys 生物传感器分析 SP 与纤溶酶原 B 区来源肽段的结合；用圆二色光谱分析 SP 诱导的纤溶酶原结构变化；在小鼠血栓模型中评价溶栓效果。结果：SP 以浓度依赖方式增强 t-PA 对 Glu-纤溶酶原的激活，催化效率（kcat/Km）提高 11.4 倍；位于纤溶酶原 B 区近 C 端的合成肽 FEKDKYILQGVTSWGLG 显著抑制 SP 与纤溶酶原结合；SP 与 Glu-纤溶酶原复合物的近紫外 CD 谱与 Glu-纤溶酶原明显不同；SP 在小鼠血栓模型中剂量依赖地促进早期再通，但在 t-PA 基因缺失小鼠中无效。结论：SP 结合纤溶酶原 B 区并促进 t-PA 激活纤溶酶原，从而诱导有效溶栓。
英文摘要
BACKGROUND: A synthetic nonadecapeptide (SP; GPYLMVNVTGVDGKGNELL) previously enhanced the activation of plasminogen by the SAK/plasmin complex.
OBJECTIVES: To identify the binding site for SP on plasminogen and elucidate the effects of SP on plasminogen activation by the tissue-type plasminogen activator (t-PA).
METHODS: The effects of SP on plasminogen activation were estimated using a chromogenic substrate and from the cleavage of plasmin on SDS-PAGE under reduced conditions. The binding to SP of various peptides derived from the amino acid sequence of plasminogen was analyzed with an IAsys biosensor. The SP-mediated structural change to plasminogen was analyzed by circular dichroism (CD) spectroscopy. The thrombolytic effects of SP were examined using a mouse model of thrombosis.
RESULTS: SP enhanced the activation of plasminogen by t-PA. The catalytic efficiency (k(cat)/K(m)) of Glu-plasminogen activation by t-PA was 11.4-fold higher in the presence than absence of SP. The binding of SP to plasminogen was greatly inhibited by a synthetic peptide, FEKDKYILQGVTSWGLG, located close to the C-terminal of the plasminogen B region. Near-ultraviolet CD spectra of the complex between SP and Glu-plasminogen significantly differed from those of Glu-plasminogen. When SP was administered in a mouse model of thrombosis, early recanalization was observed in a dose-dependent manner. However, SP did not cause recanalization in t-PA gene-deficient mice.
CONCLUSIONS: SP bound to the B region and promoted the activation of plasminogen by t-PA, and then induced effective thrombolysis.