电化学生物传感器 2011

Bilayer lipid membrane biosensor with enhanced stability for amperometric determination of hydrogen peroxide.

Talanta Zheng L, Xiong L, Zheng D, Li Y, Liu Q, Han K, Liu W, Tao K, Yang S, Xia J
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组成图示

Bilayer lipid membrane biosensor with... 传感器构成示意图

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传感器类型

电化学生物传感器

检测对象

过氧化氢(hydrogen peroxide, H2O2);样品基质:0.1 mol/L pH 7.0 PBS 缓冲液(含 0.4 mmol/L HQ)

检测原理

HRP 嵌入 DMPC 支撑型双层脂质膜中,PDA 电聚合膜覆盖其表面,形成类生物膜微环境并保护酶。当 H2O2 扩散至电极界面时,被 HRP 催化还原;对苯二酚(HQ)作为可溶性电子介体被氧化,电子经 HRP 传递至玻碳电极。在恒电位 -150 mV 下,H2O2 浓度升高使催化还原电流增大,稳态安培电流与 H2O2 浓度成正比。BLM 限制大分子干扰并降低背景噪声,PDA 膜进一步屏蔽抗坏血酸、半胱氨酸等干扰物并减少酶泄漏,从而增强选择性、重复性和稳定性。

检测灵敏度

LOD: 1.0 × 10−7 mol L−1 (S/N = 3);线性范围: 2.5 × 10−7–3.1 × 10−3 mol L−1;相关系数 = 0.9992

效应效果

该传感器对 H2O2 响应时间小于 5 s,校准曲线相关系数 0.9992,相对标准偏差 2.8%。选择性方面,40 倍浓度的抗坏血酸(AA)、L-半胱氨酸(l-cys)和甘氨酸(Gly)均不干扰 H2O2 测定,归因于 PDA 膜对干扰物的屏蔽。重现性方面,6 个独立制备电极的 RSD 为 3.2%;同一电极连续 20 次测量电流仅下降 2.5%。储存稳定性显著优于 HRP/BLM 电极:PDA/HRP/BLM 在 4°C、0.1 mol/L pH 7.0 PBS 中保存 3 周仍保留 84% 初始响应,RSD 4.5%;而 HRP/BLM 4 天内损失 80% 初始响应。作者认为其灵敏度优于已有 H2O2 BLM 传感器,适用于 H2O2 的长期稳定监测。

传感器的构成

  • 基底电极:玻碳电极(GCE),经氧化铝抛光和超声清洗,作为电子转导基底。
  • 支撑型双层脂质膜:二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)自组装形成 BLM,提供类生物膜微环境并限制大分子干扰。
  • 酶识别/催化元件:辣根过氧化物酶(HRP)嵌入 BLM,催化 H2O2 还原。
  • 表面稳定层:聚多巴胺(PDA)电聚合薄膜,覆盖 HRP/BLM 表面,增强机械/储存稳定性并屏蔽干扰物。
  • 电子介体:对苯二酚(HQ),在 HRP 催化下参与电子传递,产生安培电流。
  • 工作缓冲液:0.1 mol/L pH 7.0 PBS,含 0.4 mmol/L HQ,维持酶活性和介体浓度。

中文摘要

本文报道了一种在双层脂质膜(BLM)表面电聚合聚多巴胺(PDA)膜、并固定辣根过氧化物酶(HRP)的生物传感器。电化学阻抗谱(EIS)用于监测 PDA 膜对 HRP/BLM 电极的覆盖。循环伏安法(CV)用于研究 PDA/HRP/BLM 电极上 H2O2 的电催化还原。该传感器对 H2O2 的响应时间小于 5 s,在 2.5×10−7 至 3.1×10−3 mol/L 浓度范围内获得良好线性关系,检出限为 1.0×10−7 mol/L(S/N=3)。在 0.1 mol/L pH 7.0 PBS 中 4°C 保存 3 周后,BLM/HRP/PDA 生物传感器的响应电流仍保留初始值的 84%。PDA 膜覆盖使 PDA/HRP/BLM 生物传感器的选择性、重复性和储存稳定性显著提高。

英文摘要

In this paper, a polydopamine (PDA) film is electropolymerized on the surface of bilayer lipid membrane (BLM) which is immobilized with horseradish peroxidase (HRP). The coverage of the PDA film on HRP/BLM electrode is monitored by electrochemical impedance spectroscopy (EIS). The electrocatalytic reduction of H(2)O(2) at the PDA/HRP/BLM electrode is studied by means of cyclic voltammetry (CV). The biosensor has a fast response to H(2)O(2) of less than 5s and an excellent linear relationship is obtained in the concentration range from 2.5×10(-7) to 3.1×10(-3) molL(-1), with a detection limit of 1.0×10(-7) molL(-1) (S/N=3). The response current of BLM/HRP/PDA biosensor retains 84% of its original response after being stored in 0.1 molL(-1) pH 7.0 PBS at 4°C for 3 weeks. The selectivity, repeatability, and storage stability of PDA/HRP/BLM biosensor are greatly enhanced by the coverage of polydopamine film on BLM.