其他(电磁压电声学传感器 EMPAS) 2011

Label-free detection of HIV-2 antibodies in serum with an ultra-high frequency acoustic wave sensor.

Talanta Sheikh S, Blaszykowski C, Thompson M
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组成图示

Label-free detection of HIV-2 antibod... 传感器构成示意图

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传感器类型

其他(电磁压电声学传感器 EMPAS)

检测对象

HIV-2 抗体(HIV-2 antibodies, anti-gp36 单克隆抗体)、HIV-1 抗体(HIV-1 antibodies, anti-gp41 单克隆抗体,非特异/交叉对照);样品基质:胎牛血清(FBS)

检测原理

AT-cut石英EMPAS在1.06 GHz超高频下产生压电声学共振。CATD/HTS混合SAM通过硅氧烷键锚定于石英表面,CATD的ω-氯乙酰基经NaI氯/碘交换转化为ω-碘乙酰基,再与HIV-2 gp36表位肽NSWGCAFRQVC共价固定,形成识别界面。当含anti-gp36抗体的FBS流过表面时,抗体与固定表位特异性结合,使传感器表面质量、粘弹性和界面状态发生变化,导致共振频率偏移;anti-gp41及血清基质成分的非特异吸附/交叉反应也会引起较小频率偏移。PBS冲洗去除未结合物质后,频率偏移大小与结合量相关,从而实现无标记实时检测。该体系未使用酶、荧光或电化学放大策略。

检测灵敏度

检测水平: 100 µg/mL

效应效果

在胎牛血清(FBS)基质中,anti-gp36特异性结合产生16 kHz频率偏移,明显高于anti-gp41非特异/交叉结合产生的5 kHz,表明传感器能区分HIV-2与HIV-1抗体,具有良好选择性。但特异性实验重现性一般,RSD为22%,可能受探针空间互补性控制影响;非特异实验RSD为9%,且结合可抵抗PBS冲洗,提示存在血清基质非特异吸附和HIV-1抗体交叉反应。论文未报告稳定性、实际样品回收率或与ELISA等方法的定量对比。作者认为该SAM–EMPAS平台是EMPAS在生物分析领域的首个真实世界应用,当前检测水平为100 µg/mL,仍需降至pg/mL才能满足现代HIV检测需求。

传感器的构成

  • 基底/换能器:AT-cut quartz wafer(20.0 MHz 基频)作为 EMPAS 压电声学换能器。
  • 混合自组装单分子层:CATD(三氯硅烷基-ω-氯乙酰基连接分子)与 HTS(己基三氯硅烷)形成 1/1/2000 (v/v/v) 混合 SAM,提供硅氧烷锚定和反应性头基。
  • 碘代活化层:NaI/无水丙酮处理将 CATD 的 ω-氯乙酰基转化为 ω-碘乙酰基,提高表面反应性。
  • 识别元件:HIV-2 gp36 免疫优势表位十一肽 NSWGCAFRQVC(0.1 mg/mL,DMF)共价固定于碘代 SAM,用于捕获 HIV-2 抗体。
  • 信号标记物:无标记(label-free),直接通过声学频率偏移读出。
  • 检测流路:flow-through cell 与 Dulbecco's PBS(PBS)流动注射系统,用于样品进样和冲洗。
  • 信号读出:EMPAS 电磁压电声学传感器在 1.06 GHz(53 次谐波)监测共振频率偏移。

中文摘要

本文报道一种用于检测HIV-2的无标记免疫传感器。该平台由混合自组装单分子层(SAM)修饰的石英晶圆构成,并在其表面固定HIV-2免疫优势表位探针。采用电磁压电声学传感器(EMPAS)在超高频(1.06 GHz)下实时监测抗原–抗体相互作用引起的共振频率偏移。实验以含HIV-2或HIV-1单克隆抗体的血清溶液作为样品,分别评估特异性结合与非特异性吸附/交叉反应。结果显示,特异性结合产生的频率偏移明显高于非特异性结合,表明该SAM–EMPAS组合能在真实血清基质中区分HIV-2与HIV-1抗体,具有良好选择性。这是EMPAS技术在生物分析领域的首个真实世界应用,为HIV血清学检测提供了无标记、实时、高灵敏的潜在方法。

英文摘要

Herein is described a label-free immunosensor dedicated to the detection of HIV-2. The biosensor platform is constructed as a mixed self-assembled monolayer-coated quartz wafer onto which HIV-2 immunodominant epitopes are immobilized. The biosensing properties, in terms of specific vs. non-specific antigen-antibody interactions, are evaluated with the electromagnetic piezoelectric acoustic sensor (EMPAS) using equimolar serum solutions of HIV-2 or HIV-1 monoclonal antibodies, respectively. This immunosensor constitutes the first real-world application of the EMPAS technology in the bioanalytical field.