组成图示
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传感器类型
表面等离子共振(SPR)生物传感器
检测对象
抗原（antigen, Ag）；样品基质为 HBS-P 缓冲液（10 mM Hepes、150 mM NaCl、0.005% P-20，含 100 μg/mL BSA）
检测原理
单克隆抗体经 EDC/NHS 共价固定于 Biacore CM4 芯片表面，抗原注入后与 mAb 特异性结合，使 SPR 界面质量/折射率增加，共振角发生偏移，仪器以响应单位（RU）记录结合信号。结合相 RU 随抗原浓度升高而增大，解离相反映复合物解离速率；参考流路用于双参考扣除非特异变化。每次注入后用 glycine-HCl 脉冲解离复合物以恢复表面。该方法无酶或标记放大，信号直接来自结合质量变化。
检测灵敏度
—
效应效果
该方法通过七步自动注入评估再生方案。示例中，10 mM glycine-HCl pH 2.0 单脉冲导致后续抗原结合响应逐步下降；pH 1.5 单脉冲使表面失活；pH 2.5 两脉冲仍不能重现，而每次注入后六次 15 s 的 10 mM glycine-HCl pH 2.5 脉冲使第 4、5、7 次抗原传感器曲线完全重叠。随后完整动力学实验以 470 pM–15 nM 六浓度抗原三重注入，曲线高度重叠，表明表面在约 220 次再生脉冲后仍稳定。未报告 RSD、回收率或与 ELISA/HPLC/qPCR 的对比。
传感器的构成
- 基底/换能器：Biacore CM4 芯片，SPR 换能器，含羧甲基葡聚糖基质
- 活化修饰层：EDC/NHS，活化芯片羧基以共价固定配体
- 封闭层：ethanolamine，封闭残余活化羧基
- 识别元件：monoclonal antibody (mAb)，共价偶联于一个流路，特异性结合抗原
- 参考表面：另一流路仅 EDC/NHS 活化并用 ethanolamine 封闭，用于双参考扣除
中文摘要
确定最佳表面再生条件是获得高效、稳健的蛋白质-蛋白质相互作用动力学数据的基础。本文提出一种系统、策略化的 Biacore 表面再生条件筛选方法，由自动化的七步抗原/缓冲液注入方案和配套数据判读算法组成。该方案依次进行四次抗原注入和三次缓冲液注入，每次注入后均施加同一候选再生程序，并通过比较第 1、4、5、7 次抗原结合响应的相对变化，判断再生循环是否充分、是否造成配体失活，以及表面是否可重复。方法以抗原与单克隆抗体相互作用为例：10 mM glycine-HCl pH 2.0 单脉冲导致响应逐步下降，pH 1.5 使表面失活，pH 2.5 两脉冲仍不足，最终每次注入后六次 15 s 的 10 mM glycine-HCl pH 2.5 脉冲使后续抗原响应完全重叠，并支持完整动力学实验。该方法可推广至任何需要表面再生的生物传感器检测。
英文摘要
Determining the optimal conditions for surface regeneration is fundamental for performance of efficient and robust protein-protein interaction kinetic studies. We devised a systematic methodology comprised of an automated seven-cycle analyte and buffer injection Biacore scheme and data interpretation algorithm. The efficiency and utility is illustrated using an antigen/monoclonal antibody interaction that required ultimately six pulses of acid for regeneration. This technique has broad applicability to any biosensor assay that requires regeneration of a surface.