传感器类型
压电(QCM)生物传感器
检测对象
胆红素(bilirubin, BR);样品基质:血清(serum)、磷酸盐缓冲液(PBS, pH 7.4)
检测原理
该传感器以QCM为换能器,以分子印迹HAP薄膜为识别层。制备时,胆红素作为模板参与HAP溶胶-凝胶成膜,随后用氨水去除模板,在薄膜中留下与胆红素形状和官能团互补的印迹空腔。检测时,溶液中的胆红素扩散进入HAP薄膜并与印迹空腔特异性结合,结合事件使传感器表面质量增加。根据Sauerbrey关系,质量增加导致石英晶体谐振频率下降,频率变化量与胆红素浓度在一定范围内呈线性关系。该过程无需酶、抗体或荧光标记,属于无标记质量传感;高浓度下印迹空腔饱和,响应趋于平缓。
检测灵敏度
LOD: 0.01 μM (S/N = 3);线性范围: 0.05–80 μM;灵敏度斜率: -103.9 Hz/μM;R = 0.9990;线性方程: y (Hz) = −377.5 − 103.9[BR] (μM)
效应效果
该传感器响应时间约37 min,短于文献中1 h和2 h的MIP传感器;线性范围0.05–80 μM,宽于0.1–7.0 mg/dl、0.45–11.0 mg/dl和1.0–5.0 mg/dl;LOD 0.01 μM,低于8×10−5 mol/L。选择性方面,与胆绿素、胆固醇、睾酮相比,印迹HAP薄膜的相对选择性系数分别为2.06、2.14和2.33倍高于非印迹膜。传感器连续使用8次,第8次信号损失约2.6%,室温保存8个月仍稳定。血清加标回收率为96.83%–101.50%,RSD为2.9%–5.6%,表明其可用于实际血清胆红素检测。
传感器的构成
- 基底/换能器:AT-cut 9 MHz 石英晶体(QCM)与真空镀金电极(Au),提供压电换能并传导频率信号
- 修饰层:分子印迹羟基磷灰石薄膜(BR-imprinted HAP film),表面溶胶-凝胶法制备,厚度约1.2 μm,形成印迹结合位点
- 识别元件:胆红素印迹空腔(BR-imprinted cavities),由胆红素模板去除后形成,选择性结合胆红素(BR)
- 信号标记物:无外加标记物,采用无标记质量传感,胆红素结合质量直接改变QCM频率
- 读出装置:TTL-IC振荡器(IC 74LS04)与频率计数器(Iwatsu SC-7201),监测频率变化并输出信号
中文摘要
本文报道了一种用于胆红素(bilirubin, BR)检测的新型压电生物传感器。作者采用分子印迹与表面溶胶-凝胶技术,在石英晶体表面制备了胆红素印迹羟基磷灰石(BR-imprinted HAP)薄膜,并将其作为识别层用于QCM传感。该传感器无需外加标记物,通过胆红素与印迹空腔的特异性结合引起质量变化,从而改变石英晶体谐振频率。结果表明,该传感器具有较高选择性和较好重现性,响应时间约37 min,线性范围为0.05–80 μM,检出限为0.01 μM。与已有方法相比,其线性范围更宽、检出限更低。血清样品加标检测表明,该传感器可用于实际血清中胆红素的测定,验证了其在临床分析中的应用潜力。
英文摘要
A novel piezoelectric sensor has been developed for bilirubin (BR) detection, based on the modification of molecularly imprinted hydroxyapatite (HAP) film onto a quartz crystal by molecular imprinting and surface sol-gel technique. The performance of the developed BR biosensor was evaluated and the results indicated that a sensitive BR biosensor could be fabricated. The obtained BR biosensor presents high-selectivity monitoring of BR, better reproducibility, shorter response time (37 min), wider linear range (0.05-80μM) and lower detection limit (0.01μM). The analytical application of the BR biosensor confirms the feasibility of BR detection in serum sample.