组成图示
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传感器类型
荧光生物传感器
检测对象
酪氨酰胺（tyrosinamide, Tym）、赭曲霉毒素A（ochratoxin A, OTA）、腺苷（adenosine, Ade）；样品基质为结合缓冲液/溶液（未涉及实际生物或食品基质）
检测原理
该传感器采用均相荧光偏振换能。荧光标记DNA适配体先与靶标小分子结合；靶标结合引起适配体构象/空间位阻变化，使其部分抵抗PDE I从3'端的酶切。无靶标时，适配体被PDE I逐步消化为小片段，荧光染料旋转相关时间短，荧光各向异性r低；靶标存在时，探针弱消化、平均分子体积增大，染料运动受限，r升高。以Δr=r-rmin作为分析信号，Δr随靶标浓度增加而增大。信号放大来自酶切保护：靶标浓度越高，被保护的适配体比例越高，FP响应越强，无需分离步骤。
检测灵敏度
Tym: LOD: 15 μM；线性范围: 0–250 μM（原文表述为 up to 250 μM）；R^2 = 0.994；OTA: LOD: 70 nM；线性范围: 0–1 μM（原文表述为 up to 1 μM）；R^2 = 0.978；Ade: LOD: 5 μM；线性范围: 0–25 μM（原文表述为 up to 25 μM）；R^2 = 0.977
效应效果
该FP平台在Tym体系中TR探针RSD<6%，F探针RSD<3.5%；随机序列对照无响应。选择性良好：Tyr、Phe不干扰Tym，N-乙酰酪氨酸不干扰OTA，肌苷/鸟苷不干扰Ade。性能：Tym LOD 15 μM，线性至250 μM（R2=0.994）；OTA LOD 70 nM，线性至1 μM（R2=0.978）；Ade LOD 5 μM，线性至25 μM（R2=0.977）。未报道稳定性、实际样品回收率或方法对比。作者认为其简单、通用、均相，可高通量/多路复用。
传感器的构成
- 反应载体：黑色96孔微孔板（Greiner Bio-one black 96-well microplate）与结合缓冲液（20 mM Tris-HCl、20 mM MgCl2、10 mM NaCl、pH 7.5），提供均相反应环境。
- 识别元件：DNA适配体（Apt-49-T抗酪氨酰胺、Apt-36-O抗赭曲霉毒素A、Apt-32-A抗腺苷），特异性结合靶标并改变酶切保护程度。
- 信号标记物：5'端荧光染料Texas Red（TR）或fluorescein（F），经C6间隔臂连接，用于荧光偏振/各向异性检测。
- 酶切探针：磷酸二酯酶I（PDE I, type IV from Crotalus atrox），从3'端逐步切除核苷酸，使无靶标时探针变小、FP降低。
- 反应终止剂：5 M尿素（urea），终止PDE I消化反应并稳定最终荧光偏振信号。
- 对照元件：荧光素标记随机序列DNA（scrambled DNA），用于验证信号来源于适配体-靶标特异性结合。
- 读出系统：Tecan Infinite F500微孔板读数仪，使用F（485±20/535±25 nm）或TR（585±20/635±30 nm）滤光片计算r或Δr。
中文摘要
本文报道了一种基于靶标诱导适配体酶切保护的新型荧光偏振（FP）适配体传感平台。该方法通过荧光偏振分析磷酸二酯酶I（PDE I）介导的荧光标记适配体尺寸变化来检测小分子。首先以酪氨酰胺/抗酪氨酰胺DNA适配体体系作为模型建立概念验证。无靶标时，标记适配体被PDE I从3'端酶切为小DNA片段，荧光各向异性/偏振信号较低；酪氨酰胺结合后，适配体部分抵抗酶切，弱消化探针的平均分子体积增大，FP信号升高。随后将该方法应用于赭曲霉毒素A（OTA）和腺苷（Ade）检测。结果表明，该策略兼具简单性和通用性，可用于均相、高通量的小分子适配体传感。
英文摘要
A novel fluorescence polarization (FP) aptasensing platform based on target-induced aptamer enzymatic cleavage protection is reported. The method relies on the FP analysis of the phosphodiesterase I mediated size variation of a dye-labeled aptamer. The tyrosinamide/antityrosinamide DNA aptamer couple was firstly tested as a model system to establish the proof-of-concept. In the absence of the target, the labeled aptamer was enzymatically cleaved into small DNA fragments, leading to a low FP signal. Upon tyrosinamide binding, the DNA substrate was partially protected against the enzymatic attack, leading to an increase in the fluorescence anisotropy response as a result of the higher average molecular volume of the weakly digested probe. The method was subsequently applied to two other systems, i.e., for the detection of ochratoxin A and adenosine. Such an approach was found to combine simplicity and general applicability features.