传感器类型
其他(生物传感器界面材料研究)
检测对象
无明确分析物(界面表征);模型结合物:生物素化磷脂囊泡(biotinylated liposomes/vesicles),样品基质:HEPES-1/HEPES-2 缓冲液。
检测原理
该界面通过聚(L-赖氨酸)正电主链与负电 Nb2O5 表面静电吸附形成单层;非生物素化 PLL-g-PEG 的 PEG 链构成惰性背景,抑制血清蛋白等非特异吸附。含 PEG-biotin 的共聚物在惰性基质中形成离散‘泊位’,暴露生物素。加入链霉亲和素后,生物素-链霉亲和素高亲和结合使局部聚合物刷变硬、变高,AFM 中呈现亮斑;再加入生物素化磷脂囊泡,囊泡通过表面生物素结合到链霉亲和素上,形成可成像的纳米颗粒。囊泡或亮斑密度随 PPB21 比例增加而增加,反映反应位点密度。若用于传感,该结构可将识别事件转化为界面形貌/质量变化,并通过抗非特异背景提高信噪比。
检测灵敏度
原文未报告 LOD、线性范围、灵敏度斜率或相关系数。
效应效果
OWLS 检测限约 1 ng/cm2,三种 PLL-g-PEG 界面在人体血清中均未检测到蛋白吸附,抗非特异吸附能力强。AFM 显示混合界面均匀、无相分离;链霉亲和素结合后亮斑密度与 PPB21 比例相关,PPB21-5% 和 PPB21-10% 斑点间距分别为 52±6 nm 和 34±4 nm,OWLS 估算相邻 PPB21 距离约 37 nm 和 26 nm。单个聚合物直径为 19±6 nm(83 kDa)和 34±7 nm(1096 kDa)。生物素化囊泡覆盖稀疏,仅部分链霉亲和素位点被功能化,作者归因于刷层末端分布、PEG-biotin 多结合及孵育时间。该‘泊位’架构可控制反应位点密度并降低噪声,适用于生物传感器界面。
传感器的构成
- 基底/换能器:硅片上溅射 20 nm Nb2O5 层,经 2-丙醇、超纯水及氧等离子体清洗,提供负电荷氧化物表面并作为 AFM 成像基底。
- 聚合物修饰层:PLL-g-PEG(PLL(29)-g[5.4]-PEG(2))与 PLL-g-PEG-biotin(PPB21、HMW-PPB57)从 HEPES-1 缓冲液静电吸附,形成抗非特异蛋白吸附的 PEG 刷。
- 反应位点:PEG-biotin 侧链(biotin-PEG-NHS 衍生)暴露生物素,作为特异性结合位点。
- 桥接/识别元件:链霉亲和素(streptavidin,0.1 mg/mL)结合表面生物素,形成刚性蛋白标记。
- 模型效应物/信号标记:生物素化磷脂囊泡(DOPC:DPPE-lc-biotin = 9:1,约 50 nm)结合链霉亲和素,用于 AFM 可视化。
- 读出系统:接触模式 AFM(Nanoscope IIIa Multimode,Si3N4 探针)在 HEPES-2 缓冲液中成像形貌与粗糙度。
中文摘要
生物传感器系统的信噪比一方面取决于活性识别组分对分析物的亲和力,另一方面取决于其对无关刺激的惰性。由玻璃、二氧化硅或过渡金属氧化物等构成的传感器组件常发生非特异性相互作用,导致环境蛋白等物质非特异吸附,成为主要噪声来源。作者此前提出一种聚合物界面,在抑制非特异吸附的同时允许高亲和力的特异性相互作用:将生物素化与非生物素化的聚(L-赖氨酸)-接枝-聚乙二醇(PLL-g-PEG)从水溶液中共组装到带负电的 Nb2O5 等氧化物表面。本研究利用原子力显微镜(AFM)逐步考察该反应性/惰性聚合物界面在制备各步骤中的纳米尺度组织,包括聚合物吸附、链霉亲和素装载以及生物素化囊泡结合,以阐明“泊位”结构中反应位点在惰性 PEG 基质中的分布与均匀性。
英文摘要
The signal-to-noise ratio of a sensor system is determined by the affinity of its active component for the analyte on one hand and its inertness with respect to unrelated stimuli (noise) on the other hand. Nonspecific interactions between the environment and biosensor components (typically constructed from glass, silica, or transition metal oxides) result in nonspecific adsorption onto the latter and constitute a major source of noise. We have previously introduced a polymeric interface for preventing nonspecific adsorption while allowing for high-affinity, specific interactions. It is based on the coassembly of biotinylated and nonbiotinylated poly(l-lysine)-graft-poly(ethylene glycol) from aqueous solutions to negatively charged surfaces, such as Nb(2)O(5). In this study, we investigated by atomic force microscopy the nanoscale organization of this interface for each individual step involved in the preparation of a bioactive interface: polymer adsorption, loading with streptavidin, and binding of biotinylated vesicles.