荧光生物传感器 2012

Electrofluidic lipid membrane biosensor.

Small (Weinheim an der Bergstrasse, Germany) Lee YK, Nam JM
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组成图示

Electrofluidic lipid membrane biosensor. 传感器构成示意图

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传感器类型

荧光生物传感器

检测对象

霍乱毒素B亚基(cholera toxin subunit B, CTB);样品基质:去离子水/低盐电泳液(DI water, low-salt electrophoresis solution)

检测原理

CTB 与 SLB 中脂质锚定 GM1 结合后,限制 GM1 热运动并诱导邻近脂质有序化,形成凝胶相域,降低膜侧向流动性。在平行于双分子层的直流电场下,带负电的 Texas Red-DHPE 荧光脂质发生电泳,向 Cr 屏障聚集;同时 CTB-GM1 复合物因电渗流向相反方向漂移,形成电泳-电渗双重放大。凝胶相域作为不可穿透障碍,增加荧光脂质迁移阻力,使 Cr 屏障附近累积荧光强度(AFI)降低。AFI 与 CTB 浓度呈负相关,通过荧光显微镜定量读取,实现目标蛋白检测。

检测灵敏度

LOD: 1 pm;线性范围: 1 pm–10 nm

效应效果

该传感器在 5 次电泳-恢复循环中 AFI 标准偏差为 0.025,表明重现性和可靠性高,且同一膜道可重复使用。检测限约 1 pm,动态范围至少四个数量级(1 pm–10 nm),比单纳米颗粒追踪、荧光相关光谱和荧光漂白恢复等 SLB 流动性方法提高 10 倍以上。低电压电泳(20 V cm−1)下焦耳热可忽略,未观察到温度和 pH 变化。DMOPC 全流动相膜对照证明信号主要来自蛋白结合诱导的脂质有序化。平台可并行检测多个 Cr 围栏,并可微流控集成,适用于膜受体-配体相互作用研究和高通量筛查。

传感器的构成

  • 基底/换能器电极:Eagle 2000 玻璃基底承载 SLB,Pt 电极施加直流电场
  • 图案化屏障层:10 nm Cr 围栏(Cr corrals,100 μm × 100 μm)阻挡并聚集荧光脂质
  • 脂质双分子层:SLB 由 DMPC(99.3 mol%)、GM1(0.5 mol%)、Texas Red-DHPE(0.2 mol%)组成
  • 识别元件:脂质锚定神经节苷脂 GM1 作为 CTB 受体
  • 信号标记物:Texas Red-DHPE 带负电荧光脂质,其迁移与累积产生荧光信号
  • 目标物:霍乱毒素 B 亚基(CTB),FITC-CTB 用于验证
  • 电场放大元件:DC 20 V cm−1 电场驱动电泳与电渗,放大流动性变化
  • 读出装置:倒置荧光显微镜/TIRF 显微镜测量累积荧光强度(AFI)

中文摘要

细胞膜受体与配体相互作用是药物研发和疾病诊断的关键,但现有支持脂质双分子层(SLB)传感方法常存在操作复杂、检出限高和动态范围有限等问题。本文报道了一种图案化 SLB 电液(EF)生物传感器,用于快速、灵敏和高通量检测细胞膜受体结合配体。该传感器在玻璃基底上制作铬(Cr)围栏图案,并构建由二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、神经节苷脂 GM1 和 Texas Red-DHPE 荧光脂质组成的 SLB。目标蛋白霍乱毒素 B 亚基(CTB)与 GM1 结合后,限制脂质运动并诱导凝胶相域,降低膜侧向流动性。在平行直流电场下,带负电的 Texas Red-DHPE 向 Cr 屏障电泳聚集,而 CTB-GM1 复合物因电渗流向相反方向漂移,形成双重放大。通过荧光显微镜测量 Cr 屏障附近累积荧光强度(AFI),AFI 随 CTB 浓度增加而降低。该传感器检出限约 1 pm,动态范围为 1 pm–10 nm,比同类 SLB 流动性方法提高 10 倍以上,并具备可重复、可复用和并行检测能力。

英文摘要