组成图示
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传感器类型
其他（PCR/ESI-MS质谱生物传感器）
检测对象
病毒污染物（viral contaminants）：细小病毒（Minute mouse virus, MMV）、逆转录病毒（X-MuLV）、心肌病毒（EMCV）、呼肠病毒（ReoIII）、蓝舌病毒（Bluetongue virus）；样品基质：CHO、Vero、MDCK、MRC-5细胞基质或血浆。
检测原理
PLEX-ID以PCR引物识别病毒基因组中广泛保守区段，发生特异性结合后通过PCR指数扩增产生病毒特异性核酸片段，实现核酸信号放大。扩增产物经电喷雾电离质谱（ESI-MS）离子化，仪器按片段质量与碱基组成形成特征谱。病毒拷贝数越高，PCR产物量越多，质谱特征信号越强。Ibis软件将获得的碱基组成特征与已知病毒属数据库比对，从而鉴定病毒属或发现未知病毒。该方法不依赖单一抗原抗体反应，而依靠核酸保守区段扩增与质谱特征识别，可在复杂细胞基质或血浆背景中检测低丰度病毒。
检测灵敏度
原文未报告LOD、线性范围、灵敏度斜率、相关系数；仅报告加标水平：20,000和200,000 copies/mL。
效应效果
在Vero、CHO和MRC-5三种细胞基质中，PCR/ESI-MS在20,000和200,000 copies/mL两种加标水平下均正确识别细小病毒（MMV）；逆转录病毒（X-MuLV）未检出，心肌病毒（EMCV）和呼肠病毒（ReoIII）需使用含相应靶标的二级面板确认。含或不含细胞背景的对照样品均未检出病毒，未知病毒被鉴定为蓝舌病毒，结果经独立确认。盲样来自生物制药企业，涵盖细小病毒、逆转录病毒、心肌病毒和呼肠病毒四个组别。作者称该技术可靶向50多种病毒属，适用于复杂核酸背景中低丰度病原体检测，但选择性、稳定性、重现性和回收率未报告，仍需进一步评估。
传感器的构成
- 识别元件：病毒保守区段PCR引物/扩增体系，靶向50多种RNA/DNA病毒属并扩增病毒基因组片段。
- 信号标记物：PCR扩增产物（病毒DNA/RNA片段），其碱基组成特征作为质谱识别信号。
- 换能器/读出：电喷雾电离质谱仪（ESI-MS），将PCR产物离子化并检测质量/碱基组成特征。
- 数据分析模块：Ibis基因组特征分析软件与可视化工具，用于匹配病毒属并识别未知病毒。
中文摘要
本文报道了利用Ibis PLEX-ID通用生物传感器检测与鉴定生物制品中病毒污染物的方法。该技术基于聚合酶链式反应（PCR）扩增病毒基因组中广泛保守区段，再采用电喷雾电离质谱（ESI-MS）分析PCR产物的碱基组成特征，从而实现对常见及新发病毒的快速识别。作者开发了靶向50多种RNA和DNA病毒属的PCR检测体系，并对来自生物制药企业的盲样进行检测。样品包括加入CHO、Vero、MDCK、MRC-5等细胞基质或血浆中的已知病毒分离株。盲样涵盖细小病毒（MMV）、逆转录病毒（X-MuLV）、心肌病毒（EMCV）和呼肠病毒（ReoIII），加标水平为20,000和200,000 copies/mL。PCR/ESI-MS在两种浓度下均正确识别MMV；X-MuLV未检出；EMCV和ReoIII需通过含相应靶标的二级面板确认；未知病毒被鉴定为蓝舌病毒。对照样品未检出病毒，结果经独立确认。作者认为该技术可快速、准确地检测低丰度病原体，有助于保障生物制品安全，但仍需进一步评估。
英文摘要
CONFERENCE PROCEEDING Proceedings of the PDA/FDA Adventitious Viruses in Biologics: Detection and Mitigation Strategies Workshop in Bethesda, MD, USA; December 1-3, 2010 Guest Editors: Arifa Khan (Bethesda, MD), Patricia Hughes (Bethesda, MD) and Michael Wiebe (San Francisco, CA).