传感器类型
其他(驱动素-微管分子马达运输抗干扰研究)
检测对象
乙酸(acetic acid)、次氯酸钠(sodium hypochlorite)、丙酮(acetone)、乙醇(ethanol)、甲醇(methanol)、甲苯(toluene)、汽油(gasoline)、防冻液(antifreeze)、沙土(sandy soil)、有机质(organic matter);样品基质:BRB80运动缓冲液稀释样品。
检测原理
该研究以驱动素-微管分子马达系统作为传感/运输单元:玻璃流室表面经酪蛋白处理后固定驱动素重链,罗丹明标记微管结合到驱动素上。加入ATP后,驱动素水解ATP产生机械功,使微管沿表面滑动;罗丹明荧光在倒置荧光显微镜下被CCD相机记录,通过时间序列图像计算微管位移和滑动速度。干扰物加入后,若引起pH显著下降或氧化氨基酸,可分别导致驱动素失活或微管解聚,使速度下降甚至停止;若为丙酮、防冻液或有机质,可能通过溶剂化/渗透压等改变马达活性,使速度增强。信号直接以MT滑动速度随干扰物浓度变化读出,未使用额外化学放大。
检测灵敏度
原文未报告LOD、线性范围、灵敏度斜率或相关系数。
效应效果
0.01%、0.1%、1%干扰物下,乙酸使微管速度降低约13%和36%,1%无运动;次氯酸钠0.01%无显著差异(P=0.796),0.1%和1%完全丧失运输,主要因微管解聚。丙酮1%显著增快(P<0.003),防冻液0.1%和1%速度增加约30%和37%(P<0.001),有机质0.01%、0.1%、1%增加约25%、34%、35%(P<0.001)。乙醇、甲醇、甲苯、汽油、沙土无显著影响。25/50 μM紫杉醇或戊二醛交联可增强1%乙酸中微管形态稳定,但驱动素仍失活;50 μM紫杉醇增强抗次氯酸钠稳定,但微管脱离且无运动。作者认为该系统对复杂样品有韧性,适合智能尘埃传感器,但需评估更多干扰物与时间效应。
传感器的构成
- 基底/流室:玻璃载玻片与#1盖玻片,双胶带密封形成流动池,承载马达与微管。
- 封闭/吸附层:酪蛋白(casein),预孵育于流室,提供表面并减少非特异吸附。
- 马达层:组氨酸标签驱动素重链(kinesin heavy chain),固定于表面,水解ATP驱动微管运动。
- 运输载体/识别元件:微管(MTs,rhodamine tubulin聚合,paclitaxel稳定),作为分子穿梭,背景中可抗体功能化捕获分析物。
- 能量底物:ATP,驱动素水解ATP提供运动能量。
- 信号标记物:罗丹明标记微管(rhodamine tubulin),提供荧光用于运动成像。
- 读出系统:Olympus IX71倒置荧光显微镜与Hamamatsu ORCA CCD相机,采集时间序列图像并计算微管滑动速度。
中文摘要
生物分子马达驱动的主动运输是纳米生物传感器和生物分析设备中分析物处理的替代方式。例如,最近报道的原型“智能尘埃”生物传感器中,驱动素马达处理抗体功能化微管以捕获和分离光学标记蛋白分析物。然而该技术潜在限制是原始样品中可能存在的干扰化合物抑制运输功能。本文表征了驱动素-微管运输对一系列潜在干扰物的响应,包括溶剂、酸、氧化剂和环境污染物。驱动素运动实验结果表明,在测试干扰物中,只有乙酸和次氯酸钠对微管运输产生不利影响,主要由于微管丝解聚。其余化合物未观察到负面影响;丙酮、防冻液和有机物存在时运动增强。总体而言,数据表明驱动素-微管运输对多种常见干扰物具有韧性,但主要易受pH显著变化或氧化剂存在导致的失效影响。
英文摘要
Biomolecular motor-powered active transport represents an alternate means for analyte processing in nanoscale biosensors and bioanalytical devices. For example, a prototype "smart dust" biosensor has recently been reported in which the motor protein kinesin processes antibody-functionalized microtubules (MTs) to capture and separate optically tagged protein analytes. A potential limitation of this technology, however, involves the inhibition of transport function by interfering compounds that may be present in raw samples. Here we characterized the response of kinesin-MT transport to a range of potential interferents including solvents, acids, oxidizers, and environmental contaminants. The results of kinesin motility assays suggest that, among the tested interferents, only acetic acid and sodium hypochlorite adversely affected MT transport, primarily due to depolymerization of MT filaments. While negative effects were not observed for the remaining compounds tested, enhancement in motility was observed in the presence of acetone, antifreeze, and organic matter. Overall, the data suggest that kinesin-MT transport is resilient against a variety of common interferents, but primarily susceptible to failure due to significant changes in pH or the presence of an oxidizer.