量子点生物传感器 2012

One-pot synthesized DNA-CdTe quantum dots applied in a biosensor for the detection of sequence-specific oligonucleotides.

Chemistry (Weinheim an der Bergstrasse, Germany) Zhang C, Xu J, Zhang S, Ji X, He Z
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组成图示

One-pot synthesized DNA-CdTe quantum ... 传感器构成示意图

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传感器类型

量子点生物传感器

检测对象

乙肝病毒表面抗原基因寡核苷酸(HBV surface-antigen gene oligonucleotide / HBV DNA);样品基质为 Tris-HCl 缓冲液(0.2 M,150 mM NaCl,pH 7.4)

检测原理

该传感器基于一锅法合成的 DNA–CdTe 量子点与石墨烯之间的荧光共振能量转移(FRET)。DNA 配体含硫代磷酸酯,优先结合 CdTe 表面,另一端为序列特异性单链探针。加入 HBV 靶 DNA 后,探针与靶 DNA 杂交形成双链 DNA。未杂交的单链 DNA 碱基部分暴露,与石墨烯发生强 π–π 堆积,石墨烯作为 FRET 受体高效猝灭量子点荧光;杂交形成的双链 DNA 碱基暴露减少,π–π 堆积和氢键作用减弱,量子点与石墨烯距离增大,FRET 效率降低,荧光恢复。靶 DNA 浓度越高,双链比例越高,荧光恢复值 ΔF 越大。检测在 350 nm 激发下通过荧光强度变化实现,无需对量子点或石墨烯进行额外标记。

检测灵敏度

LOD: 10.4 nm;线性范围: 50–1600 nm;R = 0.9985

效应效果

石墨烯对单链 DNA–CdTe 量子点的荧光猝灭效率超过 96%,而对杂交形成的双链 DNA 体系猝灭效率降至 54%,二者差异构成检测基础。DNA–CdTe 量子点量子产率约 20%,高于仅 GSH 配体的 CdTe 量子点(13%),发射峰 513–584 nm,分散性更好。检测线性范围为 50–1600 nM,LOD 为 10.4 nM,R=0.9985。方法依赖序列特异性杂交和 ssDNA/dsDNA 对石墨烯吸附差异,具有较好的选择性;无需标记量子点或石墨烯,合成步骤简单、成本较低。作者认为该平台可扩展至适配体识别蛋白及多重 DNA 检测,但文中未报告实际样品回收率、RSD 或与 ELISA/qPCR 的对比。

传感器的构成

  • 检测体系:溶液相荧光 FRET 体系,无固定基底或电极,使用 Tris-HCl 缓冲液(0.2 M,150 mM NaCl,pH 7.4)
  • 量子点供体:CdTe 纳米晶(CdTe QDs),一锅法合成,发射峰 513–584 nm,量子产率约 20%
  • DNA 配体/识别元件:含硫代磷酸酯(phosphorothiolate)的序列特异性 ssDNA,通过硫代磷酸酯结合 CdTe 表面,另一端与 HBV 靶 DNA 杂交
  • 共配体/稳定剂:谷胱甘肽(GSH),与 DNA 共同稳定 CdTe QDs 表面
  • 能量受体/猝灭剂:石墨烯(graphene),由氧化石墨烯(GO)热还原制备,对 ssDNA 强猝灭、对 dsDNA 弱猝灭
  • 分散稳定剂:十二烷基苯磺酸钠(SDBS,0.02 wt%),用于石墨烯水分散
  • 信号读出:荧光发射信号,350 nm 激发下监测量子点荧光恢复 ΔF

中文摘要

本文报道了一种一锅法合成 DNA–CdTe 量子点并用于序列特异性寡核苷酸检测的荧光生物传感器。传统 DNA 标记量子点多依赖链霉亲和素–生物素偶联或共价偶联,存在供体–受体距离大、成本高或合成步骤复杂等问题。作者以谷胱甘肽(GSH)和含硫代磷酸酯的特定序列 DNA 为共配体,一步合成不同发射波长的核酸功能化 CdTe 纳米晶,DNA 通过硫代磷酸酯优先结合 CdTe 表面,另一端作为识别区。检测时,DNA–CdTe 量子点上的单链 DNA 探针与乙肝病毒(HBV)靶 DNA 杂交形成双链 DNA;随后加入石墨烯。单链 DNA 碱基暴露,与石墨烯发生强 π–π 堆积,使量子点荧光被高效猝灭;双链 DNA 碱基暴露减少,π–π 堆积减弱,荧光共振能量转移(FRET)效率降低,荧光恢复。基于该 ssDNA/dsDNA 识别差异,实现了 HBV DNA 的定量检测,线性范围为 50–1600 nM,检出限为 10.4 nM,相关系数 R=0.9985。该方法无需标记量子点或石墨烯,合成简单、成本低,可扩展至蛋白和多重 DNA 检测。

英文摘要