其他(磁旋转生物传感器) 2012

Self-assembled magnetic bead biosensor for measuring bacterial growth and antimicrobial susceptibility testing.

Small (Weinheim an der Bergstrasse, Germany) Kinnunen P, McNaughton BH, Albertson T, Sinn I, Mofakham S, Elbez R, Newton DW, Hunt A, Kopelman R
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组成图示

Self-assembled magnetic bead biosenso... 传感器构成示意图

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传感器类型

其他(磁旋转生物传感器)

检测对象

尿路致病大肠杆菌(uropathogenic Escherichia coli, UPEC)生长/菌量、链霉素(streptomycin)与庆大霉素(gentamicin)的最低抑菌浓度(MIC);样品基质:Müller-Hinton (MH) 肉汤/琼脂培养物稀释液

检测原理

链霉亲和素功能化超顺磁微球经生物素化抗大肠杆菌抗体捕获细菌。在倒置 Müller-Hinton 液滴底部,旋转磁场使磁珠自组装成稳定盘状簇并异步旋转。磁扭矩与流体拖曳平衡时,旋转角速度 θdot 与拖曳 γ=κηV 成反比,旋转周期 T 随有效体积 V 增大而增加。细菌生长附着并增殖,使簇周围有效体积和拖曳增大,旋转频率下降;抗生素抑制生长时周期基本不变。倒置液滴曲率作为透镜将旋转簇阴影放大约100倍,激光/LED 光被周期性遮挡,光电探测器记录光强,FFT 或自相关提取旋转频率,从而反映细菌生长与 MIC。

检测灵敏度

原文未报告 LOD、线性范围、灵敏度斜率或 R^2。

效应效果

未扰动自组装簇的旋转频率在2小时内仅变化0.7%,显示良好时间稳定性。对尿路致病大肠杆菌,AMBR 测得链霉素 MIC 为 8 μg/mL、庆大霉素 MIC 为 2 μg/mL;临床 Vitek 2 参考值分别为 16 和 2 μg/mL,在可接受容差内一致。显微镜观察与 AMBR 结果相符:链霉素 0 和 2 μg/mL 时磁珠被细菌推开,4 和 8 μg/mL 时基本无生长。16孔原型采用现成电感、激光二极管和光电二极管,接种与未接种样品在2小时内出现可区分差异。作者指出后续开发可实现更高孔数、15 min 协议、1×10^4 CFU/mL 起始浓度和更短结果时间,具有快速高通量 AST 应用价值。

传感器的构成

  • 基底/样品容器:PTFE 涂覆载玻片或 PDMS 样品卡,形成倒置悬挂液滴,提供气-水界面、自定位与透镜放大
  • 磁场驱动换能器:Helmholtz 线圈或标准电感,产生 100 Hz、1 mT 旋转磁场,驱动磁珠簇异步旋转
  • 磁性微球修饰层:2.8 μm 超顺磁性微球(Invitrogen Dynal M-280),表面链霉亲和素功能化,作为自组装旋转单元
  • 识别元件:生物素化抗大肠杆菌抗体(biotinylated anti-E. coli antibody, Abcam ab20640-1),经链霉亲和素-生物素结合捕获细菌
  • 稳定/封闭介质:Müller-Hinton (MH) 肉汤,含约 1.75% 酪蛋白水解物(casein hydrolysate),稳定磁珠簇形状并支持细菌生长
  • 信号放大元件:倒置液滴曲率透镜,将磁珠簇阴影放大约 100 倍,增强光学读出
  • 读出元件:激光/LED 光源、光电二极管或相机(Basler piA640-210gm)及 LabView/StaT tracker,检测旋转周期/频率

中文摘要

针对抗生素耐药问题,快速抗菌药物敏感性试验(AST)对指导治疗至关重要。本文报道一种新型自组装异步磁性微球旋转(AMBR)生物传感器,用于检测细菌生长并测定最低抑菌浓度(MIC)。该传感器由抗体包被的超顺磁性微球在倒置液滴界面自组装成稳定簇,在旋转磁场中异步旋转;细菌生长会改变簇的有效体积和流体拖曳,从而改变旋转周期。作者利用含酪蛋白水解物的 Müller-Hinton 肉汤稳定簇形,并采用倒置液滴透镜将旋转阴影放大约100倍,通过光电检测提取旋转频率。实验测定尿路致病大肠杆菌对链霉素和庆大霉素的 MIC 分别为 8 和 2 μg/mL,与临床 Vitek 2 参考值一致。基于现成电子元件的16孔原型可在2小时内区分接种与未接种样品,显示高通量快速 AST 应用潜力。

英文摘要

Bacterial antibiotic resistance is one of the major concerns of modern healthcare worldwide, and the development of rapid, growth-based, antimicrobial susceptibility tests is key for addressing it. The cover image shows a self-assembled asynchronous magnetic bead rotation (AMBR) biosensor developed for rapid detection of bacterial growth. Using the biosensors, the minimum inhibitory concentration of a clinical E. coli isolate can be measured within two hours, where currently tests take 6-24 hours. A 16-well prototype is also constructed for simple and robust observation of the self-assembled AMBR biosensors.