荧光生物传感器 2012

CEA fluorescence biosensor based on the FRET between polymer dots and Au nanoparticles.

Chemical communications (Cambridge, England) Lin Z, Zhang G, Yang W, Qiu B, Chen G
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组成图示

CEA fluorescence biosensor based on t... 传感器构成示意图

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传感器类型

荧光生物传感器

检测对象

癌胚抗原(CEA, carcinoembryonic antigen);样品基质:20 mM HEPES缓冲液(pH 7.4),文中未明确血清、尿液等临床样品基质

检测原理

PFO dots作为荧光供体,Au-NPs作为猝灭受体,二者通过ssDNA与CEA适配体杂交形成三明治FRET复合物,PFO dots荧光被有效猝灭,初始信号较低。加入CEA后,CEA与适配体特异性结合,使适配体从DNA双链中释放,Au-NPs与PFO dots距离增大,FRET猝灭减弱,PFO dots荧光恢复。CEA浓度越高,被适配体结合的复合物解离越多,荧光恢复越强。荧光强度I与CEA浓度对数呈线性:I=79.12 log C+268.15。该策略利用适配体高选择性识别和PFO dots高亮发光实现信号放大。

检测灵敏度

线性范围: 0.1–10 ng mL−1;I = 79.12 log C + 268.15;R = 0.9975

效应效果

该传感器在0.1–10 ng/mL范围内线性良好,R=0.9975;Au-NPs对PFO dots最大猝灭率约80%,孵育30 min达到最大猝灭。选择性方面,在10 ng/mL浓度下,AFP、BSA和凝血酶等干扰蛋白未引起与CEA相当的荧光恢复,CEA可被清晰区分。稳定性方面,功能化颗粒一周后仍可将2 ng/mL CEA正确检测,相对误差小于5%。作者认为与量子点猝灭体系相比,PFO dots高亮发光使检测限更低,方法具有临床检测CEA的应用潜力。

传感器的构成

  • 发光纳米材料:聚(9,9-二辛基芴-2,7-二基)点(PFO dots),作为荧光供体/发光体,浓度1 ppm
  • 猝灭纳米材料:金纳米粒子(Au-NPs),作为荧光猝灭剂,浓度20 nM
  • 识别元件:CEA适配体(CEA aptamer),特异性识别并结合癌胚抗原(CEA),同时作为连接链
  • 连接链:与CEA适配体部分互补的单链DNA(ssDNA),分别修饰在PFO dots和Au-NPs表面,通过杂交形成三明治结构
  • 被测物:癌胚抗原(CEA),结合适配体后破坏杂交结构,引起荧光恢复
  • 缓冲体系:20 mM HEPES缓冲液,pH 7.4,维持反应环境
  • 信号读出:荧光强度(I),随CEA浓度增加而增强

中文摘要

本文报道了一种基于聚合物点与金纳米粒子间荧光共振能量转移(FRET)的癌胚抗原(CEA)荧光生物传感器。以聚(9,9-二辛基芴-2,7-二基)点(PFO dots)作为高亮发光体,金纳米粒子(Au-NPs)作为猝灭剂,通过单链DNA(ssDNA)杂交构建三明治结构。CEA适配体连接PFO dots与Au-NPs,使PFO dots荧光被有效猝灭;当CEA存在时,适配体优先与CEA结合,释放并破坏该结构,Au-NPs远离PFO dots,荧光恢复。荧光增强与CEA浓度在0.1–10 ng/mL范围内呈线性关系。相比量子点,聚合物点具有较高荧光量子产率、良好光稳定性和生物相容性;实验显示Au-NPs对PFO dots最大猝灭率约80%,孵育30 min达到最大猝灭,对AFP、BSA和凝血酶等干扰蛋白选择性良好,功能化颗粒一周后仍保持检测能力。

英文摘要

Polymer dots were employed as luminophors to design a fluorescence biosensor for carcinoembryonic antigen (CEA) with high sensitivity and selectivity; the increased fluorescence intensity is proportional to CEA concentration in the range of 0.1-10 ng mL(-1).