电化学生物传感器 2012

Enzyme immobilization and direct electrochemistry based on a new matrix of phospholipid-monolayer-functionalized graphene.

Chemistry, an Asian journal Liu J, Han L, Wang T, Hong W, Liu Y, Wang E
阅读原文 PDF DOI PubMed

组成图示

Enzyme immobilization and direct elec... 传感器构成示意图

点击图片查看大图 · 依据论文自动绘制

传感器类型

电化学生物传感器

检测对象

过氧化氢(Hydrogen peroxide, H2O2);样品基质:磷酸盐缓冲液(PBS, 0.1 M, pH 7.0)

检测原理

DMPG-G 基质中,DMPG 磷脂单层层膜通过范德华作用覆盖在还原石墨烯表面,形成类生物膜微环境;MP11 被固定在该基质中,血红素活性中心保持天然构象。检测时,H2O2 扩散至电极表面并与 MP11 血红素中心发生酶促还原反应,H2O2 被还原,MP11 在氧化/还原态间循环。石墨烯的高导电性促进 MP11 血红素中心与 GCE 之间的直接电子转移,磷脂层则维持酶活性取向。随着 H2O2 浓度升高,催化还原电流(阴极峰)显著增大,而反向扫描中 MP11 氧化峰逐渐降低,最终消失。因此,通过循环伏安或催化电流读出,可依据电流响应与 H2O2 浓度的线性关系实现定量检测。

检测灵敏度

LOD: 7.2×10−7 M;线性范围: 2.0×10−6–4.5×10−4 M;R^2 = 0.9997;最大电极灵敏度: 50.6 mA mM−1

效应效果

该传感器对 H2O2 具有宽线性范围和低检出限,作者指出其检测范围与检出限优于 HRP 固定于 DMPG 脂质双层膜、血红蛋白固定于卵磷脂膜以及 MP11 固定于壳聚糖/石墨烯复合物的相关报道。对 80 mM H2O2 连续 5 次循环伏安测量,响应 RSD 为 2.1%;6 个独立制备电极的 RSD 为 5.3%。24 h 后峰电流仅下降 1.0%;4°C 干燥保存 20 d 后催化电流保持约 91%。原文未报告选择性、抗干扰或实际样品加标回收率。作者认为 DMPG-G 兼具生物相容性与导电性,是构建第三代电化学生物传感器的理想平台,并可能用于生物模拟和药物递送。

传感器的构成

  • 基底/工作电极:玻璃碳电极(GCE),抛光后作为电化学换能器
  • 纳米材料修饰层:磷脂单层层膜功能化石墨烯(DMPG-G),由 DMPG 磷脂单层层膜非共价修饰还原石墨烯形成,提供导电通道与生物相容微环境
  • 识别/催化元件:微过氧化物酶-11(MP11),固定于 DMPG-G 基质中,作为血红素模型酶催化 H2O2 还原
  • 信号标记物:无外加标记物,MP11 血红素活性中心直接参与电子转移并产生催化电流
  • 检测介质:磷酸盐缓冲液(PBS,0.1 M,pH 7.0),氮气饱和,用于电化学测量
  • 电极体系:Ag/AgCl 参比电极与铂丝辅助电极,构成三电极体系

中文摘要

本文报道了一种用于酶固定化及后续直接电化学与电催化的新型纳米复合材料。该材料以 1,2-二肉豆蔻酰-sn-甘油-3-磷酸-(1-rac-甘油) 磷脂单层层膜修饰石墨烯(DMPG-G)为基质,通过 DMPG 脂质体存在下用抗坏血酸化学还原氧化石墨烯的非共价策略制备。以微过氧化物酶-11(MP11)为模型酶,考察该复合体系。由于石墨烯导电性增强和磷脂单层层膜提供的生物相容微环境,固定于 DMPG-G 中的 MP11 有效保持天然结构与生物活性。DMPG-G-MP11 修饰玻璃碳电极(DMPG-G-MP11/GCE)呈现一对清晰准可逆氧化还原峰,并对过氧化氢(H2O2)具有较高电催化活性。所构建生物传感器对 H2O2 的线性响应范围为 2.0×10−6–4.5×10−4 M,检出限为 7.2×10−7 M,且具有良好的重现性和长期储存稳定性。结果表明,磷脂-石墨烯纳米复合材料是血红素蛋白直接电化学的理想候选材料,可作为构建第三代生物传感器的通用平台。

英文摘要

A new nanocomposite material for enzyme immobilization and subsequent direct electrochemistry and electrocatalysis was developed by using 1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phospho-(1-rac-glycerol)-phospholipid-monolayer-membrane-modified graphene (DMPG-G). Microperoxidase-11 (MP11) was chosen as a model enzyme to investigate the composite system. Owing to the improved conductivity and biocompatible microenvironment, MP11 that was immobilized in the matrix of the DMPG-G nanocomposite (DMPG-G-MP11) effectively retained its native structure and bioactivity. DMPG-G-MP11-modified glassy carbon electrode (DMPG-G-MP11/GCE) exhibited a pair of well-defined quasi-reversible redox peaks of MP11 and showed high electrocatalytic activity towards hydrogen peroxide (H(2)O(2)). The linear response of the developed biosensor for the determination of H(2)O(2) ranged from 2.0×10(-6) to 4.5×10(-4)  M with a detection limit of 7.2×10(-7)  M. This biosensor exhibited high reproducibility and long-term storage stability. The promising features of this biosensor indicate that these lipid-graphene nanocomposites are ideal candidate materials for the direct electrochemistry of redox proteins and that they could serve as a versatile platform for the construction of a third-generation biosensor.