组成图示
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传感器类型
侧流层析试纸条
检测对象
Bt Cry1Ab蛋白（Cry1Ab）；样品基质：PBS缓冲液、玉米面粉提取液（加标）
检测原理
样品中的Cry1Ab经样品垫和结合垫毛细迁移至NC膜T线，被固定兔多克隆抗体pAb2捕获；结合垫中FLPL-BSAS-mAb1偶联物上的小鼠单克隆抗体mAb1与Cry1Ab结合。该偶联物由Atto 647N荧光染料标记多聚赖氨酸（PL），通过生物素-链霉亲和素系统（BSAS）与生物素化mAb1自组装，使单个抗体携带大量荧光染料，实现荧光信号放大。T线荧光面积AT与C线内标RIgG-FL/GAR产生的AC面积之比AT/AC随Cry1Ab浓度增加而线性增加，由便携式荧光试纸读数仪扫描定量。
检测灵敏度
LOD: 10 pg/mL；线性范围: 0–1,000 pg/mL；标准曲线: y = 0.0013x + 0.0219；R^2 = 0.9958
效应效果
该方法检测时间约10 min，灵敏度较传统LFIA提高约100倍，LOD为10 pg/mL，比磁珠ELISA和金标LFIA低100倍。对Cry1C、Cry2A、Cry3A等相近Cry蛋白无交叉反应，选择性良好。标准曲线各浓度CV均低于10%，C线内标信号在不同样品中基本不变，稳定性较好。在非转基因玉米面粉提取液加标实验中，回收率为80.05%–109.69%，CV为3.8%–9.5%（n=5），表明基质干扰可接受。作者认为该方法快速、灵敏、可定量，适合转基因玉米Cry1Ab蛋白的日常监控和现场筛查。
传感器的构成
- 基底/支撑层：塑料背板（plastic backing），承载各组件。
- NC膜：硝酸纤维素膜（NC membrane，Millipore HF090），层析载体。
- T线识别元件：兔多克隆抗体（pAb2，1 mg/mL），捕获Cry1Ab。
- C线识别元件：山羊抗兔IgG（GAR，1 mg/mL），捕获RIgG-FL内标。
- 结合垫：玻璃纤维（glass fiber），含FLPL-BSAS-mAb1和RIgG-FL，溶于0.01 M PBS含0.5% BSA、3%蔗糖。
- 样品垫：玻璃纤维（glass fiber），预处理3% BSA和0.5% Tween-20，加载样品。
- 吸收垫：吸收垫（absorbent pad），吸收多余液体。
- 信号标记物：Atto 647N（FL）标记多聚赖氨酸（PL）形成FLPL，经BSAS与生物素化mAb1偶联为FLPL-BSAS-mAb1；RIgG-FL为内标。
- 封闭/稳定剂：BSA、蔗糖、Tween-20、叠氮化钠（sodium azide），封闭非特异结合并稳定偶联物。
中文摘要
本文报道了一种用于检测Cry1Ab的新型侧流免疫分析（LFIA）信号放大策略。该方法以多聚赖氨酸（PL）链和生物素-链霉亲和素系统（BSAS）实现放大：将多个荧光染料（FL）直接包覆在PL表面，并通过BSAS与抗体偶联，构建FLPL-BSAS-mAb1信号放大偶联物。试纸条T线固定捕获抗体，C线固定内标抗体；样品经毛细作用迁移后，Cry1Ab被T线捕获并与荧光偶联物结合，T线荧光面积与C线内标面积之比用于定量。与传统LFIA相比，该方法灵敏度提高约100倍，优化后线性范围为0–1,000 pg/mL，检出限为10 pg/mL，检测时间约10 min。作者认为其可作为常规免疫分析替代方法，用于Cry1Ab的日常监控。
英文摘要
A novel lateral flow immunoassay (LFIA) signal amplification strategy for the detection of Cry1Ab based on amplification via a polylysine (PL) chain and biotin-streptavidin system (BSAS) is described. In this system, multiple fluorescence dyes (FL) were directly coated on the surface of PL and conjugated with antibody via the BSAS for construction of novel signal amplification (FLPL-BSAS-mAb1) conjugates, in which FL, PL and BSAS were employed to improve the sensitivity of LFIA. Compared with conventional LFIA, the sensitivity of FLPL-BSAS-mAb1-based LFIA was increased by approximately 100-fold. Quantified linearity was achieved in the value range of 0-1,000 pg/mL. The limit of detection (LOD) was reached 10 pg/mL after optimization of reaction conditions. To our knowledge, this represents one of the most sensitive LFIA for Cry1Ab yet reported. Furthermore, the detection time for this method was about 10 min. Therefore, it should be an attractive alternative compared to conventional immunoassays in routine control for Cry1Ab.