组成图示
示意图生成中
传感器类型
表面等离子共振(SPR)生物传感器
检测对象
抗GBV-C抗体（anti-GBV-C antibodies，含抗E2/NS4/NS5抗体）；人血清（血液透析患者、慢性丙肝患者、健康献血者）
检测原理
CM5芯片表面的羧基经EDC/NHS活化后，与合成肽NS4b、NS5a、Qm1、Qm2或MAP4(E2-NS5a)的伯胺共价偶联，再用乙醇胺封闭剩余基团。人血清样品加入0.1% CM dextran后注入流动池，其中抗GBV-C抗体与固定肽表位特异性结合。抗体结合增加CM5表面质量并改变局部折射率，Biacore T100通过SPR角变化实时记录响应；空白参考通道用于扣除非特异结合。该法无酶或荧光标记放大，信号随抗体浓度和亲和力增加而增大，但复杂血清中的非特异结合会限制特异性，作者提出三明治策略可能提高特异性。
检测灵敏度
未报告LOD、线性范围、灵敏度斜率或相关系数。
效应效果
ELISA中MAP4(E2-NS5a)的AUC为0.874，高于E2(99-118)的0.751和NS5a(112-126)的0.719；在血液透析与慢性丙肝血清中AUC分别为0.806和0.947，高于MAP4(E2-NS4a)的0.626和0.764，ROC选择98%特异性。SPR中Qm1灵敏度65%（23/35），高于ELISA的40%（14/35），P=0.013；但MAP4(E2-NS5a) SPR在1/50、最高固定量下仅14/25阳性血清阳性，5/11阴性血清假阳性，特异性低于ELISA。作者认为非特异结合是主要障碍，SPR-MAP未优于ELISA，肽ELISA简单、廉价、可靠，MAP4(E2-NS5a)具血清诊断价值。
传感器的构成
- 基底/换能器：CM5传感器芯片（Biacore T100用，羧甲基葡聚糖CM dextran涂层表面），提供SPR换能界面与羧基
- 活化层：NHS（0.05 M）与EDC（0.2 M）活化CM5表面羧基，形成氨基反应性酯
- 识别元件：NS4b(8-22)、NS5a(112-126)、Qm1、Qm2或MAP4(E2-NS5a)肽，经伯胺共价偶联，捕获抗GBV-C抗体
- 封闭剂：乙醇胺（1 M，pH 8.5）灭活剩余反应基团，降低非特异结合
- 抗非特异添加剂：0.1% CM dextran加入血清，减少CM涂层表面非特异结合
- 参考通道：仅活化并封闭的空白CM5通道，用于扣除非特异结合信号
- 读出系统：Biacore T100 SPR仪器，监测抗体结合引起的表面折射率变化
中文摘要
本研究开发用于诊断GB病毒C（GBV-C）感染的合成嵌合多抗原肽（MAPs）。为提高线性肽序列的抗原性，作者合成了包含GBV-C包膜蛋白E2及非结构蛋白NS4、NS5表位的四聚体分支MAPs，并通过ELISA比较其与单体线性肽被特异性抗体识别的效率。同时，利用商业表面等离子共振（SPR）生物传感器检测人血清中的抗GBV-C抗体。结果显示，含E2和NS5a序列的MAP4(E2-NS5a)在ELISA中表现出优于线性肽的敏感性和特异性，能够检测商业E2重组蛋白ELISA漏检的部分样本，具有用于GBV-C血清学诊断的潜在临床价值，可为血液透析及丙型肝炎病毒（HCV）感染人群中的感染流行率研究提供基础。
英文摘要
The use of synthetic peptides of both structural and nonstructural proteins of GB virus C (GBV-C) has been studied for the development of new systems to diagnose infection caused by this virus. In an attempt to increase the antigenicity of linear peptide sequences, chimeric multiple antigenic peptides (MAPs) containing epitopes from E2, NS4, and NS5 GBV-C proteins have been synthesized. The synthetic constructs were evaluated by ELISA to establish whether the epitopes in chimeric branched peptides are more efficiently recognized by the specific antibodies compared to the monomeric linear sequences. Moreover, we have investigated the application of a commercial biosensor instrument for the detection of antibodies against the GBV-C in human serum samples. The results of the immunoassays reported in this work highlight the usefulness of synthetic tetrameric branched peptides containing sequences from envelope and nonstructural GBV-C proteins for the diagnosis of GBV-C infection. The potential clinical value of the MAP(4)(E2-NS5a) for the serodiagnosis of GBV-C infection was demonstrated, thus providing the basis for performing prevalence studies of the infection among the hemodialyzed and hepatitis C virus (HCV)-infected population.