组成图示
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传感器类型
表面等离子共振(SPR)生物传感器
检测对象
T-2 毒素（T-2 toxin）、HT-2 毒素（HT-2 toxin）；样品基质：小麦（wheat）、早餐谷物（breakfast cereal）、玉米基婴儿食品（maize-based baby food）
检测原理
本方法为竞争性 SPR 免疫分析。CM5 芯片经 EDC/NHS 活化后接枝 jeffamine 伯胺，并用乙醇胺封闭；HT-2 经 CDI 形成活性 carbamate，与表面伯胺共价固定，形成捕获配体。检测时，样品提取液与抗 HT-2 单克隆抗体预先混合，样品中的 T-2 或 HT-2 与抗体结合，使抗体与芯片上固定 HT-2 的结合减少，SPR 响应单位（RU）下降。抗体对 HT-2 交叉反应为 100%，对 T-2 为 92%–121%，对其他单端孢霉烯族毒素无交叉反应。信号直接来自抗体结合质量变化，无酶促放大；按 0–80 ng/mL（谷物当量 0–1000 µg/kg）校准曲线进行半定量。
检测灵敏度
LOD: 25 µg kg−1（婴儿食品、早餐谷物）；26 µg kg−1（小麦）；校准范围: 0–80 ng mL−1（谷物当量 0–1000 µg kg−1）；R² = 0.99（SPR 与 LC–MS/MS 比较）
效应效果
该抗体对 HT-2 在缓冲液及三种基质中交叉反应均为 100%，对 T-2 分别为 92%、121%、117% 和 110%（缓冲液、婴儿食品、早餐谷物、小麦），对其他单端孢霉烯族毒素无可测交叉反应。方法内 RSD 为 0.97%–6.3%，批间 RSD 为 0.08%–6.8%；加标回收率 88%–128%。单个流路可完成 300 次以上分析循环且信号无明显衰减，40 次连续空白分析基线漂移约 80 RU、样品响应漂移约 66 RU。与 LC–MS/MS 比较 R²=0.99，未出现假阴性。方法快速、简便、成本低，适合谷物和婴儿食品中 T-2+HT-2 总和筛查。
传感器的构成
- 基底/换能器：CM5 传感器芯片（Biacore Q SPR 换能器，提供表面等离子共振信号）
- 活化层：EDC/NHS 混合液（0.4 M EDC/0.1 M NHS）活化芯片羧基，形成活性酯
- 胺接枝层：jeffamine（2,2'-(ethylenedioxy)bis(ethylamine)）接枝于芯片表面，提供与毒素反应的伯胺
- 封闭层：1 M ethanolamine（pH 8.5）封闭未反应位点
- 固相识别元件：HT-2 毒素衍生物（HT-2 carbamate，经 CDI 活化）共价固定于胺层，作为捕获配体
- 流动相识别元件：抗 HT-2 单克隆抗体（mAb，1:200 稀释于 HBS-EP），与样品中 T-2/HT-2 竞争结合
- 再生液：250 mM HCl/0.5% SDS 脉冲再生芯片表面
- 缓冲介质：HBS-EP 缓冲液，维持抗体结合与 SPR 检测环境
中文摘要
本研究建立了一种基于表面等离子共振（SPR）的快速筛查方法，用于同时检测天然污染谷物及玉米基婴儿食品中的 T-2 毒素和 HT-2 毒素。传感器芯片采用 HT-2 毒素衍生物与单克隆抗体进行竞争性免疫分析。该抗体以 HT-2 为免疫原制备，对 T-2 具有高度交叉反应，而对其他常见单端孢霉烯族毒素无交叉反应。样品经 40% 甲醇简单提取后直接上机分析。在婴儿食品、早餐谷物和小麦基质中，检出限分别为 25、25 和 26 µg/kg。方法内精密度（n=6）以相对标准偏差表示：早餐谷物 100 µg/kg 为 2.8%、200 µg/kg 为 1.8%；小麦 50 µg/kg 为 4.6%、100 µg/kg 为 3.6%；婴儿食品 25 µg/kg 为 0.97%、50 µg/kg 为 6.3%。批间精密度（n=3）分别为 6.7%、3.9%（早餐谷物），3.3%、1.6%（小麦），6.8%、0.08%（婴儿食品）。该方法快速、简便，可用于谷物和婴儿食品中 T-2/HT-2 总和的筛查。
英文摘要
A rapid surface plasmon resonance (SPR) screening assay has been developed for the combined detection of T-2 and HT-2 toxins in naturally contaminated cereals using a sensor chip coated with an HT-2 toxin derivative and a monoclonal antibody. The antibody raised against HT-2 displayed high cross-reactivity with T-2 toxin while there was no cross-reaction observed with other commonly occurring trichothecenes. A simple extraction procedure using 40% methanol was applied to baby food, breakfast cereal, and wheat samples prior to biosensor analysis. Limits of detection (LOD) for each matrix were determined as 25 microg kg(-1) for baby food and breakfast cereal and 26 microg kg(-1) for wheat. Intra-assay precision (n=6) was calculated for each matrix. The results were expressed as the relative standard deviation and determined as 2.8% (100 microg kg(-1)) and 1.8% (200 microg kg(-1)) in breakfast cereal, 4.6% (50 microg kg(-1)) and 3.6% (100 microg kg(-1)) in wheat and 0.97% (25 microg kg(-1)) and 6.3% (50 microg kg(-1)) in baby food. Between run precision (n=3) performed at the same levels yielded relative standard deviations of 6.7% and 3.9% for breakfast cereals, 3.3% and 1.6% for wheat and 6.8% and 0.08% for baby food, respectively.