组成图示
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传感器类型
侧流层析试纸条
检测对象
c-jun 蛋白（c-jun protein，DNA-binding protein）；样品基质：纯化重组 c-jun 蛋白、HeLa 细胞粗裂解液（crude cell lysate）
检测原理
该传感器利用 DNA 探针-金纳米颗粒复合物识别活性 c-jun。15 nm AuNP 通过硫醇端连接含 c-jun 结合共识序列的 probe 1，并与生物素化 probe 2 杂交形成双链探针。样品中活性 c-jun 与双链 DNA 探针上的结合序列特异性结合，形成 AuNP-DNA-c-jun 复合物；未结合 c-jun 的探针-AuNP 复合物保持游离。复合物随层析液迁移至硝酸纤维素膜，检测区抗 c-jun 单克隆抗体捕获 c-jun，使 AuNP 在检测线聚集，产生红色检测线；剩余生物素化探针-AuNP 复合物被控制区链霉亲和素捕获形成控制线。检测线峰面积/光密度随 c-jun 活性增加而增强，因此可半定量反映转录因子活性。该法无需核酸酶、荧光或放射性标记，且仅检测能结合 DNA 的活性蛋白。
检测灵敏度
LOD: 0.2 footprint unit (fpu) c-jun（视觉检出阈值）；细胞裂解液可见量: 100 μg total protein；检测时间: 10 min
效应效果
该传感器 10 min 内完成检测，视觉检出 0.2 fpu 纯化 c-jun，并可在 100 μg 以上 HeLa 粗裂解液中产生可见检测线。特异性方面，检测区无背景；突变结合序列试纸对 150 μg 裂解液无检测线；300 μg 卵白蛋白（OVA）无检测线，说明抗体可区分 c-jun 与非特异蛋白。热灭活 150 μg 裂解液无检测线，未处理 150 μg 裂解液、0.3 fpu 纯化 c-jun 及灭活裂解液加标 0.3 fpu 均产生检测线，后两者强度无显著差异（p<0.05，n=3），表明细胞成分不干扰且只检测活性 c-jun。与 EMSA 相比，EMSA 可检测 50 μg 裂解液，灵敏度更高，但本方法更快、无需电泳和标记，适合快速筛查转录因子活性。
传感器的构成
- 样品垫：玻璃纤维（fiberglass），浸样品垫缓冲液（1% Triton、1% BSA、2% 葡萄糖、50 mM 硼酸，pH 8.0），用于加样与样品释放。
- 结合垫：玻璃纤维（fiberglass），用于承载/释放 AuNP-DNA 探针复合物并启动层析。
- 硝酸纤维素膜（NC membrane）：层析载体，检测区固定抗 c-jun 单克隆抗体（anti-c-jun mAb），控制区固定链霉亲和素（streptavidin, SA）。
- 金纳米颗粒（AuNPs）：15 nm 金纳米颗粒，作为红色信号标记和 DNA 探针载体，经柠檬酸还原法制备。
- DNA 探针层：5′-巯基修饰 40-mer probe 1（SH-5′-AAAAAAAAAAAAAAAAAAAATCCGGCTGAATCATCAAGCG-3′）与 5′-生物素修饰 20-mer probe 2（biotin-5′-CGCTTGATGATTCAGCCGGA-3′）杂交形成双链探针，提供 c-jun 结合位点。
- 识别元件：双链 DNA 探针中的 c-jun 结合共识序列，特异性捕获活性 c-jun 蛋白。
- 捕获抗体：抗 c-jun 单克隆抗体（anti-c-jun mAb）固定于检测区，捕获 c-jun 并区分非特异蛋白。
- 控制捕获：链霉亲和素（SA）固定于控制区，通过 SA-生物素结合捕获剩余 probe-AuNP 复合物，指示试纸有效。
- 吸收垫：厚吸收纸（absorbent paper），吸收液体并维持层析流动。
中文摘要
本研究开发了一种基于免疫层析的侧流生物传感器，用于快速检测 DNA 结合蛋白。该传感器由样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸收垫四部分组成。含 c-jun 蛋白结合共识序列的 5′-巯基修饰 DNA 探针通过硫醇端固定在 15 nm 金纳米颗粒上，并与 5′-生物素修饰互补探针杂交形成双链 DNA 探针；抗 c-jun 单克隆抗体固定于硝酸纤维素膜检测区，链霉亲和素固定于控制区。样品中的 c-jun 蛋白与金纳米颗粒上的 DNA 结合序列结合，形成 AuNP-DNA-c-jun 复合物，经层析迁移后被检测区抗体捕获，形成红色检测线；剩余复合物由控制区链霉亲和素通过生物素-链霉亲和素作用捕获，形成控制线。该传感器可在 10 min 内视觉检测低至 0.2 footprint unit 的 c-jun，并成功用于 HeLa 细胞粗裂解液中 c-jun 活性检测，具有快速、简便、高特异性的优点。
英文摘要
A lateral flow biosensor based on an immuno-chromatographic assay has been developed for the detection of DNA-binding proteins. The biosensor is composed of four parts: a sample pad, a conjugate pad, a strip of nitrocellulose membrane and an absorbent pad. A DNA probe containing a specific protein binding consensus sequence is coated onto gold nanoparticles, while an antibody against the DNA-binding protein is immobilized onto a test zone of the nitrocellulose membrane. The target protein binds to the protein binding DNA sequence that is coated on the gold nanoparticles to form nanoparticle-DNA-protein complexes, and the complexes are then captured by the antibody immobilized on the test zone to form a red line for visual detection of the target protein. This biosensor was successfully applied to a DNA-binding protein, c-jun, and the developed biosensor allows for the rapid detection of down to 0.2 footprint unit of c-jun protein within 10 min. This biosensor was verified using HeLa cells and it visually detected c-jun activity in 100 μg of crude cell lysate protein. The antibody against c-jun used in the biosensor can distinguish c-jun from other nonspecific proteins, with high specificity.