电化学生物传感器 2012

Protein immobilization on 3C-SiC (100) as a substrate for detecting the onset of acute myocardial infarction (AMI).

Annual International Conference of the IEEE Engineering in Medicine and Biology Society. IEEE Engineering in Medicine and Biology Society. Annual International Conference Oliveros A, Guiseppi-Elie A, Jaroszeski M, Saddow SE
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组成图示

Protein immobilization on 3C-SiC (100... 传感器构成示意图

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传感器类型

电化学生物传感器

检测对象

肌红蛋白(Myoglobin, Myo);预期样品基质:血液/血清(文中未明确实际检测样品)

检测原理

该界面以 3C-SiC 为阻抗换能基底。HF 处理使表面形成羟基,APTES 通过硅烷化形成含氨基的自组装单分子层;EDC 与 Sulfo-NHS 活化 anti-Myo 的羧基,使其与表面氨基形成酰胺键共价固定,BSA 封闭剩余位点。当样品中存在 Myo 时,anti-Myo 与 Myo 发生特异性抗原抗体结合,改变 SiC 表面电荷分布、双电层结构、介电特性及界面粗糙度,从而引起阻抗谱中电阻、电容或阻抗模值/相角变化。理论上,Myo 浓度越高,结合量越大,界面阻抗变化越显著,可通过阻抗读出 Myo 浓度。本文未使用荧光、酶催化或核酸放大等信号放大策略,也未报告实际定量传感响应。

检测灵敏度

效应效果

本文未进行 Myo 定量检测,因此未报告 LOD、线性范围、选择性、RSD、回收率或与 ELISA/HPLC/qPCR 的对比。表征结果显示,APTES 修饰使静态水接触角由 16±3° 升至 62±1°,AFM RMS 粗糙度由约 0.9 nm 增至 1.1 nm,表明形成均匀有机层;XPS 在 C1s 285.5 eV 及 N1s 400.5/404.2 eV 出现 APTES 碳与氨基信号。共价固定 anti-Myo 后,AFM 显示均匀致密蛋白层,颗粒约 20 nm 或长度约 50 nm;非共价吸附表面蛋白量较低且分布不均;省略 BSA 封闭时颗粒平均约 30 nm,提示 BSA 可封闭非特异位点。作者认为 3C-SiC 是免疫传感器件的合适基底,但需优化抗体浓度和封闭步骤。

传感器的构成

  • 基底/换能器:3C-SiC (100) 单晶碳化硅,生物/血液兼容半导体基底,用于后续阻抗换能
  • 表面活化层:HF 处理形成的羟基(-OH)终止层,提供硅烷偶联位点
  • 硅烷修饰层:APTES(3-aminopropyltriethoxysilane)自组装单分子层,提供 -NH2/-NH3+ 反应基团
  • 识别元件:anti-Myo(抗肌红蛋白抗体),通过 EDC/Sulfo-NHS 共价偶联固定,用于捕获 Myo
  • 交联活化剂:EDC(1-ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimide hydrochloride)与 Sulfo-NHS(N-hydroxy-sulfosuccinimide),活化抗体羧基形成氨基反应酯
  • 封闭剂:BSA(Bovine Serum Albumin)1% in PBS,封闭非特异结合位点
  • 偶联缓冲液:MES buffer(pH 5),维持 EDC/Sulfo-NHS 偶联反应环境

中文摘要

碳化硅(SiC)已被证明具有生物相容性和血液相容性,可作为生物传感器基底材料。本文报道以 3C-SiC 为基底构建用于急性心肌梗死(AMI)早期标志物肌红蛋白(Myoglobin, Myo)检测的生物识别界面。首先通过溶剂清洗、piranha 溶液、HCl 和 HF 处理使 3C-SiC 表面羟基化;随后将样品浸入 1% 3-氨基丙基三乙氧基硅烷(APTES)/甲苯溶液中形成含氨基的自组装单分子层;再利用 EDC/Sulfo-NHS 共价偶联化学将抗肌红蛋白抗体(anti-Myo)固定于 APTES 修饰表面,并用 1% 牛血清白蛋白(BSA)封闭非特异结合位点。通过静态水接触角(SWCA)、X 射线光电子能谱(XPS)和原子力显微镜(AFM)表征,证实 APTES 层形成均匀、表面由亲水转为疏水、出现 C1s/N1s 有机与氨基信号,且抗体固定后表面呈均匀致密蛋白层。结果表明 3C-SiC 可作为免疫传感器件的合适基底,为后续基于阻抗的 Myo 浓度检测奠定基础。

英文摘要

Silicon Carbide (SiC), has been shown to be a bio- and hema-compatible substrate that could potentially be used in biosensor applications. The development of a viable biorecognition interface using SiC as the substrate material for bio-detection is described. Surface modification with 3-aminopropyltriethoxysilane (APTES) and immobilization via covalent conjugation of antimyoglobin (anti-Myo) on the modified surfaces is achieved, which are initial steps for immunosensing based devices. Successful formation of APTES layers and antibody immobilization were identified with surface water contact angle (SWCA), X-ray photoelectron spectroscopy (XPS) and atomic force microscopy (AFM).