其他(EISCAP与微机械悬臂梁生物传感器) 2009

Comparison of a potentiometric and a micromechanical triglyceride biosensor.

Biosensors & bioelectronics Fernandez RE, Hareesh V, Bhattacharya E, Chadha A
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组成图示

Comparison of a potentiometric and a ... 传感器构成示意图

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传感器类型

其他(EISCAP与微机械悬臂梁生物传感器)

检测对象

甘油三酯(triglyceride, TG;模型物三丁酸甘油酯 tributyrin, TB);样品基质:磷酸盐缓冲液(EISCAP)或去离子水(微悬臂梁)

检测原理

脂肪酶识别并水解三丁酸甘油酯,生成丁酸和甘油。EISCAP 中,丁酸使溶液 pH 下降,Si3N4 表面电荷状态改变,半导体-绝缘体界面平带电压发生偏移;通过 C-V 曲线中 Ubias 的变化读出,ΔUbias 随甘油三酯浓度在 1–7 mM 内近似线性。微悬臂梁中,水解产物增加溶液黏度和密度,使振动悬臂梁的附加质量与流体阻尼增大,谐振频率下降;频率变化随产物浓度在 10–100 μM 范围内响应。酶可通过 APTES/戊二醛共价固定,实现催化放大与在线动力学监测。

检测灵敏度

检出限: 未明确报告;EISCAP 最低响应约 0.5 mM(500 μM),摘要称低浓度灵敏度受限于 1 mM;微悬臂梁最低检测 10 μM;线性范围: EISCAP 1–7 mM,微悬臂梁 10–100 μM(频率由约 48 kHz 降至 28 kHz);灵敏度: EISCAP 5 mM 时 45 min 内 ΔUbias 29.9 mV(pH 6.97→5.54),微悬臂梁 10–100 μM 谐振频率由 ~48 kHz 降至 28 kHz;R^2: 未报告。

效应效果

两种传感器均可重复、可靠,可重复使用至化学腐蚀或机械损坏,用去离子水清洗后真空保存。EISCAP 在 1–7 mM 三丁酸甘油酯范围内线性,低于 0.5 mM 因缓冲液抑制 pH 变化而不可测;5 mM 酶固定 EISCAP 45 min 内 ΔUbias 29.9 mV,前 20 min 完成 79.9% 反应。微悬臂梁无需缓冲液,可检测 10 μM,10–100 μM 谐振频率由约 48 kHz 降至 28 kHz;100 μM 酶固定悬臂梁频率从 46.2 kHz 降至 30 min 的 38.8 kHz,前 20 min 完成 83.04% 反应。测量时间约 15 s(C-V)和 20 s(谐振)。作者认为微悬臂梁适合细胞内甘油三酯监测。

传感器的构成

  • 基底/换能器:p型单晶硅(100)晶圆(EISCAP 半导体基底)与多晶硅微悬臂梁(200 μm×20 μm×2 μm,机械谐振换能器)
  • 绝缘/敏感层:热氧化 SiO2 与 PECVD Si3N4 叠层,作为 EISCAP 的 pH 敏感介电层
  • 表面修饰层:3-氨基丙基三乙氧基硅烷(APTES)硅烷化,提供氨基用于酶固定
  • 交联/识别元件:戊二醛(glutaraldehyde)活化 APTES 氨基,共价固定脂肪酶(lipase,Pseudomonas cepacia)
  • 反应介质:磷酸盐缓冲液(PB,1 mM,pH 7,含 1 M KCl)或去离子水,用于溶解三丁酸甘油酯(tributyrin)并支持酶水解
  • 信号读出:HP 4274A LCR 表测量 EISCAP 的 C-V/平带电压偏移;多普勒振镜(Doppler vibrometer)测量微悬臂梁谐振频率

中文摘要

本文报道并比较两种硅基甘油三酯生物传感器:电解质-绝缘体-半导体电容器(EISCAP)和多晶硅微悬臂梁。两者均利用脂肪酶水解短链甘油三酯三丁酸甘油酯,但换能机制不同。EISCAP 通过水解产物丁酸引起溶液 pH 下降,使 Si3N4 敏感层界面电荷改变,导致平带电压偏移,并用电容-电压(C-V)特性读出;微悬臂梁则因水解产物使溶液黏度和密度增加,引起附加质量与阻尼变化,使谐振频率下降。EISCAP 需要缓冲液维持稳定测量,低浓度灵敏度受限于约 1 mM;微悬臂梁无需缓冲液,可检测低至 10 μM 的三丁酸甘油酯。两种传感器均可重复、可靠,并可通过 APTES/戊二醛共价固定脂肪酶实现水解动力学在线监测。微悬臂梁的 μM 级检测能力使其适合细胞内甘油三酯监测。

英文摘要

Sensitive biosensors for detection of triglyceride concentration are important. In this paper we report on two types of silicon based triglyceride sensors: an electrolyte-insulator-semiconductor capacitor (EISCAP) which is a potentiometric device and a polysilicon microcantilever. The detection principle for both sensors is based on the enzymatic hydrolysis of triglyceride though the sensing mechanisms are different: electronic for the EISCAP and mechanical for the microcantilever. The characteristics and performances of the two sensors are critically compared. The EISCAP sensor necessitates the presence of a buffer for stable measurements which limits the sensitivity of the sensor at low concentrations of the bioanalyte to 1mM. The cantilever sensor works without a buffer which improves the lower level of sensitivity to 10 microm. Both sensors are found to give reproducible and reliable results.

关键词

甘油三酯三丁酸甘油酯EISCAP微悬臂梁脂肪酶生物传感器