酶工程获得新功能需要高效遍历巨大的组合序列空间。通常，获得显著性能提升需要多个突变，而单个不良突变就可能使酶失活。为建立高通量筛选并提高不同变体之间的分辨率，作者利用工程化正反馈回路快速筛选有机磷酸酯水解酶对氧磷酶1（PON1）的遗传文库：对硝基苯酚（PNP）特异性转录因子（TF）调控PON1表达，而PON1催化对氧磷（paraox...
全细胞生物传感器利用转录因子（TF）可灵敏、选择性地检测特殊化学品或人为分子，但需要更多可用的 TF。本研究基于同源建模和配体对接识别结合口袋，并通过保守突变工程化 Acinetobacter 转录因子 PobR，使其能够识别对硝基酚（pNP），并通过 PobR 启动子驱动的荧光蛋白报告基因测量响应。在约 10^7 个 PobR 变...
在全细胞生物传感器中，分光光度法因简单可靠而常用于有机磷检测，但传感器性能受细胞固定方式影响，固定方式决定细胞量、传质速率和稳定性。本研究将此前报道的微生物附着单壁碳纳米管（SWNT）膜方法应用于全细胞有机磷传感器。作者制备了带圆形梳状驱动金电极的 MEMS 器件，以扩大细胞固定面积，并将表达周质有机磷水解酶（OPH）的大肠杆菌与酸...
本研究开发了一种用于高效检测神经毒性有机磷化合物（OPs）的全细胞阵列生物传感器。该传感器以贻贝粘附蛋白（MAP）作为微生物细胞固定连接子，将周质表达有机磷水解酶（OPH）的重组大肠杆菌固定于96孔微孔板表面。对氧磷水解活性与荧光显微镜分析表明，与简单物理吸附相比，MAP提高了细胞固定效率并增强了固定细胞的稳定性。扫描电镜分析显示，...