AMB Express
2014
Knudsen JD, Carlquist M, Gorwa-Grauslund M
本研究构建了一种用于测量酿酒酵母细胞中 NADH/NAD+ 辅因子平衡扰动的报告系统。该系统将绿色荧光蛋白基因置于 GPD2 启动子控制之下，该启动子在 NADH 过量条件下被诱导。在缺乏通过甘油合成再生 NAD+ 能力的 gpd1Δgpd2Δ 双缺失株中，获得了较高荧光水平。研究进一步在 gpd1Δgpd2Δ 背景下，通过添加丙酮...
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)
2014
Michener JK, Smolke CD
定向进化是提升低活性酶催化能力的重要策略，尤其适用于酶被改造以接受新底物或适应新环境的情形。由于酶活性强烈依赖其微环境，筛选条件应尽量接近最终应用场景。当目标酶需要在活细胞内发挥作用时，RNA 生物传感器可将难以直接测量的代谢表型，即目标小分子的生成，与易于检测的荧光表型相连接，从而在活细胞内实现高通量筛选。本文介绍了一种基于合成 ...
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)
2014
Colombo S, Martegani E
Ras蛋白在进化中高度保守，是真核细胞多条信号通路的汇聚点，参与糖异生与发酵生长转换、储存碳水化合物分解、胁迫耐受、生长控制、寿命决定、形态发生与发育等过程。它们属于小GTP酶超家族，GTP结合态为活性形式，GDP结合态为失活形式。为研究Ras蛋白激活状态以阐明Ras介导信号转导机制，本文提供一种简单、灵敏且可靠的方法，基于Ras-...