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Universal CRISPR/Cas12a-associated aptasensor suitable for rapid detection of small proteins with a plate reader.

Frontiers in bioengineering and biotechnology 2023 Li Y, Liu L, Qiao L, Deng F

CRISPR/Cas12a 因具有反式切割活性,已成为新型 DNA 生物传感器开发的关键技术。尽管其在核酸检测中表现突出,但面向非核酸靶标、尤其是皮摩尔以下浓度的通用 CRISPR/Cas 传感系统仍具挑战。DNA 适配体可通过构象变化高亲和、高特异性地结合蛋白、小分子和细胞等靶标。本文利用适配体的多样结合能力,并将 Cas12a ...

FRET Reporter Assays for cAMP and Calcium in a 96-well Format Using Genetically Encoded Biosensors Expressed in Living Cells.

Bio-protocol 2020 Milliken BT, Doyle RP, Holz GG, Chepurny OG

G蛋白偶联受体(GPCR)受激素或神经递质刺激后,常引起胞浆环磷酸腺苷(cAMP)和钙离子(Ca2+)浓度改变,从而触发细胞反应。本文描述一种基于微孔板读板机的荧光共振能量转移(FRET)检测方法,利用基因编码生物传感器 H188 和 YC3.60,在单层或悬浮活细胞中实时监测 GPCR 激动剂处理后 cAMP 或 Ca2+ 浓度变...

荧光生物传感器 FRET生物传感器cAMP钙离子GPCR

Time-lapse 3-D measurements of a glucose biosensor in multicellular spheroids by light sheet fluorescence microscopy in commercial 96-well plates.

Scientific reports 2016 Maioli V, Chennell G, Sparks H, Lana T 等 8 人

斜平面显微镜(OPM)此前已在商用倒置荧光显微镜平台上实现。本文将其改进为舞台扫描式OPM(ssOPM),使可在商用玻璃底96孔板中对三维生物培养物进行时间序列三维成像。作者利用表达葡萄糖Förster共振能量转移(FRET)生物传感器的多细胞球体,在16个视野中以10分钟间隔进行成像,作为原理验证,ssOPM还在96孔板的42个孔...

A High-Content Assay for Biosensor Validation and for Examining Stimuli that Affect Biosensor Activity.

Current protocols in cell biology 2014 Slattery SD, Hahn KM

生物传感器可用于在体内监测多种蛋白行为,但新传感器的开发与表征往往耗时费力。在传感器设计过程中,需要评估不同结构对特异性、亮度和荧光响应的影响。本文描述一种在 96 孔板格式下使用自动化显微镜进行生物传感器验证的高通量方法。该方法将生物传感器与能够刺激或抑制其报告活性的上游蛋白共表达,从而确定传感器最大激活态与失活态之间的差异,并考...