蛋白激酶调控几乎所有主要信号通路，因此可视化激酶活性的时空动态对理解细胞信号至关重要。本文报道了一种从头设计的激酶活性报告子，命名为 NOVARK，其由单条多肽链组成，包含多个模块化基序，分别作为特异性激酶底物和报告元件。NOVARK 可发生磷酸化诱导的高阶组装，表现为超亮 GFP 液滴，其动态范围大于现有基于 Förster 共振...
cAMP 差异检测器原位（cADDis）是一种新型生物传感器，可连续测量活细胞中环磷酸腺苷（cAMP）水平。该传感器由环状置换荧光蛋白连接至 Epac2 铰链区构建，形成单一荧光团生物传感器，结合 cAMP 后荧光可升高或降低。传感器具有红色和绿色向上版本以及绿色向下版本，并可提供靶向不同亚细胞定位的版本。本研究采用绿色向下 cAD...
遗传编码荧光生物传感器可通过光学检测追踪活细胞和组织中的细胞内信号动态。许多此类传感器基于 Förster 共振能量转移（FRET）原理。本文详述了一种利用光纤光度计在活体动物中检测 FRET 型生物传感器信号的简单方法。将腺相关病毒（AAV）脑内注射以表达遗传编码 FRET 生物传感器，数周后利用光纤光度计实时记录自由移动成年大鼠...
越来越多的证据表明，许多关键胞内信号事件被区室化于动力学不同的细胞微区室中。遗传编码荧光生物传感器是解析区室化信号的强大工具，但现有方法通常依赖目标蛋白融合与过表达，可能干扰天然信号通路。本文提出一类名为 FluoSTEPs（靶向内源蛋白的荧光传感器）的新型生物传感器，将自互补分裂绿色荧光蛋白、CRISPR 介导的基因敲入和荧光共振...
约40%的处方药通过G蛋白偶联受体（GPCR）发挥药效。受体激活后会引起第二信使如环腺苷酸3′,5′-单磷酸（cAMP）浓度的瞬时变化。目前已有多种基因编码生物传感器可在活细胞或组织中监测cAMP波动，其中基于Förster共振能量转移（FRET）的Epac1-camps蛋白是表征明确的cAMP传感器。新配体的药理学评价常需对产生的...
Förster 共振能量转移（FRET）可直接观察 G 蛋白偶联受体（GPCR）激活异源三聚体 G 蛋白。本研究在人类 Gα13 亚基多个位点插入 mTurquoise2，旨在开发基于 FRET 的 Gα13 激活生物传感器。三种荧光标记 Gα13 变体因能定位于质膜并在 LPA2 受体激活后招募 p115-RhoGEF 而被认为具...