Development and optimization of N-acetylneuraminic acid biosensors in Bacillus subtilis.

Biotechnology and applied biochemistry 2020 Zhang X, Cao Y, Liu Y, Liu L 等 7 人

基于转录因子（TF）的代谢物响应型生物传感器是筛选工程酶和动态调控生物合成途径的重要工具，但 TF 结合位点插入常影响启动子活性，且最优 TF 表达水平难以预测。本研究以枯草芽孢杆菌中 N-乙酰神经氨酸（NeuAc）生物传感器为案例，建立分步构建策略。首先筛选 12 个不同强度启动子构建第一启动子库；随后将大肠杆菌 NanR 结合序...

全细胞生物传感器 N-乙酰神经氨酸转录因子枯草芽孢杆菌GFP报告基因

In vivo evolutionary engineering of riboswitch with high-threshold for N-acetylneuraminic acid production.

Metabolic engineering 2020

核糖开关具有灵敏度、阈值和动态范围等可调性质，对其理性改造和筛选仍具挑战。本研究建立了一种基于生长偶联筛选的体内核糖开关进化方法，通过正选择与负选择交替富集具有目标阈值的突变体。该方法利用四环素抗性蛋白 tetA 作为双功能选择标记：在高 NeuAc 条件下，正常核糖开关抑制 tetA 表达，使细胞在 Ni2+ 中存活；在低 Neu...

荧光生物传感器 核糖开关N-乙酰神经氨酸体内进化代谢工程