场效应晶体管(FET)生物传感器 2012

Monitoring extracellular K+ flux with a valinomycin-coated silicon nanowire field-effect transistor.

Biosensors & bioelectronics Chang KS, Sun CJ, Chiang PL, Chou AC, Lin MC, Liang C, Hung HH, Yeh YH, Chen CD, Pan CY, Chen YT
阅读原文 PDF DOI PubMed

组成图示

Monitoring extracellular K+ flux with... 传感器构成示意图

点击图片查看大图 · 依据论文自动绘制

传感器类型

场效应晶体管(FET)生物传感器

检测对象

钾离子(K+,potassium ion);另对Li+、Na+、Cs+进行选择性测试;样品基质:Tris缓冲液(离子标定)和无Na+的NMG缓冲液(细胞培养/刺激)。

检测原理

VAL-PVC/SiNW-FET以含缬氨霉素(VAL)的PVC离子选择性膜作为识别层。K+进入PVC膜后与VAL特异性结合;靠近SiNW表面约10 nm内的结合电荷在SiO2/Si界面形成电场,调制n型SiNW-FET沟道载流子浓度,使源漏电导G随K+浓度升高而增大。器件在Vsd=30 mV、背栅零偏下,用Ag/AgCl溶液门接地读取ΔG。细胞实验中,尼古丁激活嗜铬细胞膜上的烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR),在无Na+的NMG缓冲液中诱导K+外流;外流K+被VAL捕获并转换为电导信号,从而实时监测细胞表面K+浓度。

检测灵敏度

LOD: 1 μM;检测范围: 10^-6–10^-2 M;表观结合常数 Ka: Li+ 67±42 M^-1, Na+ 120±23 M^-1, K+ 5974±115 M^-1, Cs+ 4121±140 M^-1。

效应效果

该传感器对K+和Cs+响应显著,对Na+和Li+响应弱;在10 mM时相对电导变化ΔG%分别为K+ 5.68±0.68%、Cs+ 4.95±0.33%、Na+ 0.48±0.13%、Li+ 0.32±0.08%,显示K+选择性。嗜铬细胞可稳定粘附于PLL修饰器件,尼古丁刺激下电导随剂量升高,5 mM尼古丁时细胞表面K+约20 μM。无细胞时尼古丁不引起明显ΔG;六甲溴铵(HB)预处理使10 nM和100 μM下归一化ΔG分别降至84±5%和64±4%,证明信号来自nAChR介导的K+外流。作者认为该器件适合细胞记录研究。

传感器的构成

  • 基底/换能器:SOI晶圆,50 nm n型单晶硅器件层与400 nm BOX层,Ni/Au接触焊盘和背面Ni/Au背栅,构成SiNW-FET。
  • 绝缘层:热氧化SiO2层,覆盖SiNW,防止电荷转移和漏电。
  • 离子选择性膜:PVC膜,含VAL、四(4-氯苯基)硼酸钾和双(1-丁基戊基)己二酸酯,厚度8.4±1.1 μm,选择性结合K+。
  • 识别元件:缬氨霉素(VAL),嵌入PVC膜中,与K+形成络合物。
  • 细胞粘附层:聚-L-赖氨酸(PLL),涂覆于器件表面,促进嗜铬细胞粘附培养。
  • 微流控/储液结构:PDMS微流控通道或储液腔,引导Tris/NMG缓冲液接触器件。
  • 溶液门电极:Ag/AgCl电极,接地作为溶液门,降低测量噪声。

中文摘要

本研究将含缬氨霉素(VAL)的聚氯乙烯(PVC)膜涂覆于硅纳米线场效应晶体管(SiNW-FET)表面,构建VAL-PVC/SiNW-FET生物传感器,用于检测活体嗜铬细胞释放的钾离子(K+)。该传感器对K+的检测灵敏度覆盖10^-6至10^-2 mol/L的宽浓度范围。在Tris缓冲液中,VAL与Li+、Na+、K+和Cs+的表观结合常数分别为67±42、120±23、5974±115和4121±140 M^-1。将嗜铬细胞培养于传感器表面后,在无Na+的浴液中用尼古丁刺激可显著增加器件电导;在5 mM尼古丁刺激下,细胞表面K+浓度约为20 μM。结果表明,VAL-PVC/SiNW-FET对细胞释放的K+具有良好敏感性和选择性,适用于细胞记录研究。

英文摘要

A silicon nanowire field-effect transistor (SiNW-FET) coated with a polyvinyl chloride (PVC) membrane containing valinomycin (VAL) was employed as a biosensor (referred to as VAL-PVC/SiNW-FET) to detect the K(+)-efflux from live chromaffin cells. The detection sensitivity of K(+) with the VAL-PVC/SiNW-FET covers a broad range of concentrations from 10(-6) to 10(-2) M. The apparent association constants between VAL and Li(+), Na(+), K(+), and Cs(+) in Tris buffer solution were determined to be 67±42, 120±23, 5974±115, and 4121±140 M(-1), respectively. By culturing chromaffin cells on the VAL-PVC/SiNW-FET, the conductance was significantly increased by nicotine stimulation in a bath buffer without Na(+). The K(+) concentration at the cell surface was determined to be ~20 μM under the stimulation of 5 mM nicotine. These results demonstrate that the VAL-PVC/SiNW-FET is sensitive and selective to detect the released K(+) from cells and is suitable for applications in cellular recording investigations.

关键词

场效应晶体管硅纳米线缬氨霉素钾离子细胞外K+外流嗜铬细胞