电化学生物传感器 2007

Characterization of different diamond-like carbon electrodes for biosensor design.

Talanta Maalouf R, Chebib H, Saikali Y, Vittori O, Sigaud M, Garrelie F, Donnet C, Jaffrezic-Renault N
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组成图示

Characterization of different diamond... 传感器构成示意图

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传感器类型

电化学生物传感器

检测对象

葡萄糖(glucose);样品基质:40 mM 磷酸盐缓冲液(PB, pH 7.4)

检测原理

葡萄糖氧化酶(GOD)选择性催化葡萄糖与氧气反应,生成葡萄糖酸和过氧化氢(H2O2)。H2O2 从酶层扩散至 DLC 工作电极表面,在固定电位 +1.0 V 下发生电化学氧化:H2O2 → O2 + 2H+ + 2e−。电子经 DLC 薄膜传递至外电路,形成安培电流。电流大小与 H2O2 浓度相关,进而与葡萄糖浓度相关。DLC 的 sp3/sp2 比例和 Ni 掺杂影响表面电子转移和 H2O2 电催化活性,从而改变灵敏度。该体系无额外信号放大,主要依赖酶催化产生 H2O2 和 DLC 对 H2O2 的电催化氧化。

检测灵敏度

葡萄糖:LOD: 20 µM (SiCAr1)、30 µM (SiCNi5%);线性范围: 至 1 mM (SiCAr1)、至 1.5 mM (SiCNi5%);灵敏度: 0.6875 µA/mM (SiCAr1, R=0.9984)、0.3654 µA/mM (SiCNi5%, R=0.9982);表观Km: 3.38 mM (SiCAr1)、3.09 mM (SiCNi5%)。H2O2电极灵敏度: SiCAr1 4.4463 µA/mM、SiCNi5% 4.6401 µA/mM。

效应效果

该工作未报告抗干扰、RSD、实际样品回收率或与 ELISA/HPLC 等方法的对比。选择性主要来自 GOD 对葡萄糖的专一催化。葡萄糖生物传感器灵敏度分别为 0.6875 和 0.3654 µA/mM,线性范围分别至 1 mM 和 1.5 mM,LOD 为 20 和 30 µM。工作稳定性测试 10 h,SiCAr1 对 0.5 mM 葡萄糖响应稳定,SiCNi5% 缓慢上升;储存 10 d 后分别保留约 48% 和 79% 初始响应,前 3 d 基本不变。作者认为 DLC 薄膜可作为电化学生物传感器换能器,SiCAr1 灵敏度较高,但稳定性需通过改进酶固定方式提升。

传感器的构成

  • 基底:p-硅(p-Si)衬底,承载 DLC 薄膜并提供导电支撑
  • 换能/修饰层:类金刚石碳(DLC)薄膜(SiCAr1 或 SiCNi5%),不同 sp3/sp2 比例或 Ni 掺杂,作为工作电极并催化 H2O2 氧化
  • 识别元件:葡萄糖氧化酶(GOD),催化葡萄糖氧化生成 H2O2
  • 交联/封闭层:戊二醛(GA)交联 GOD 与牛血清白蛋白(BSA),形成稳定生物层;甘油(glycerol)作增塑剂
  • 信号产物:过氧化氢(H2O2),酶反应产物,在 +1.0 V 下电化学氧化产生安培电流
  • 测量电极:铂片(Pt)对电极、饱和甘汞电极(SCE)参比电极,用于三电极安培测量

中文摘要

类金刚石碳(DLC)薄膜在电化学研究中备受关注。作者通过循环伏安法和安培法对不同 sp3/sp2 碳杂化比例或掺入不同比例镍的 DLC 电极进行了电化学表征,考察其对过氧化氢(H2O2)的响应。选择 SiCAr1 和 SiCNi5% 作为安培葡萄糖生物传感器的敏感换能器,采用戊二醛交联法固定葡萄糖氧化酶(GOD)。在 pH 7.4 的 40 mM 磷酸盐缓冲液中,于 +1.0 V 固定电位下测量。SiCAr1 对葡萄糖的灵敏度为 0.6875 µA/mM,高于 SiCNi5% 的 0.3654 µA/mM;检出限分别为 20 µM 和 30 µM。表观 Michaelis-Menten 常数约为 3 mM。两种生物传感器在 0.5 mM 葡萄糖下工作 10 天后,分别保留约 48% 和 79% 的初始响应。该研究比较了不同 DLC 电极对 H2O2 的电催化活性,并评估其用于葡萄糖检测的可行性。

英文摘要

Diamond-like carbon (DLC) films are gaining big interest in electrochemistry research area. DLC electrodes made with different ratio of sp(3)/sp(2) carbon hybridization or doped with different percentages of nickel were characterized electrochemically by cyclic voltammetry and by amperometric measurements towards hydrogen peroxide. SiCAr1 and SiCNi5% were chosen as sensitive transducers for the elaboration of amperometric glucose biosensors. Immobilization of glucose oxidase was carried out by cross-linking with glutaraldehyde. Measurements were made at a fixed potential+1.0V in 40mM phosphate buffer pH 7.4. SiCAr1 seems to be more sensitive for glucose, 0.6875muA/mM, than SiCNi5%, 0.3654muA/mM. Detections limits were 20muM and 30muM, respectively. Apparent Michaelis-Menten constants were found around 3mM. Forty-eight percent and 79% of the original response for 0.5mM glucose remained after 10 days for both biosensors, respectively.

关键词

类金刚石碳葡萄糖生物传感器葡萄糖氧化酶安培检测DLC电极