本文提出一种可控crRNA自转录辅助的双放大CRISPR-Cas12a策略（CST-Cas12a），用于高灵敏、高特异检测真核细胞中结构选择性核酸酶FEN1（flap endonuclease 1）活性。该策略设计含5′突出flap的分支DNA探针作为FEN1水解底物；FEN1切割产生的flap与模板探针退火，并作为引物启动延伸反应...
除识别并切割互补核酸序列的顺式切割活性外，Cas12a等Cas蛋白还具有非特异性切割单链DNA或RNA的反式切割活性，已被广泛用于核酸检测。本文报道了一种高效DNA报告子（5′-TTATT-CCCCC-3′，TTATT-5C），其性能优于多数Cas12a检测中使用的富AT报告子（5′-TTATT-3′）。通过系统研究DNA报告子长度...
基于CRISPR-Cas12的生物传感器是核酸检测的有前景工具。双链DNA靶标激活Cas12后，其反式切割活性可切断单链DNA探针，随后用侧流层析试纸条（LFT）实现快速、简便、实验室外检测。然而，现有LFT多采用反转检测区/控制区布局，检测结果不仅取决于探针是否被切割，还受未切割探针在控制区结合的影响。为此，作者提出一种用于检测反...
新冠疫情暴发导致全球大量死亡，亟需快速、准确的病毒检测方法以早期识别感染者。本研究开发了一种基于CRISPR/Cas13a反式切割活性的电化学生物传感器，用于无需核酸扩增、快速灵敏地检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）RNA。将连接单链RNA的氧化还原探针固定在由纳米复合材料（NC）和金纳米花（AuNF）修饰的电...
本文报道了一种基于目标诱导转录放大触发 CRISPR/Cas13a 反式切割活性的超灵敏碱性磷酸酶（ALP）荧光传感策略（TITAC-Cas）。该体系以整合 T7 启动子（5′-磷酸）和转录模板的双链 DNA（5′P-dsDNA）作为 ALP 底物。无 ALP 时，5′P-dsDNA 被 λ 外切酶（λexo）降解，导致 T7 转录...
准确、快速、低成本地定量疾病生物标志物，对开发早期诊断即时检测系统至关重要。CRISPR V型效应蛋白近期发现的反式切割特性，使其成为具有高精度潜力的生物识别工具。本文报道了一种基于CRISPR-Cas12a（cpf1）的电化学生物传感器（E-CRISPR），与基于光学转导的生物传感器相比，其成本更低且更便携。通过优化Cas12a的...