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Directed Evolution of Soluble α-1,2-Fucosyltransferase Using Kanamycin Resistance Protein as a Phenotypic Reporter for Efficient Production of 2'-Fucosyllactose.

Journal of microbiology and biotechnology 2022

2'-岩藻糖基乳糖(2'-FL)是母乳中最丰富的岩藻糖基化寡糖,具有多种健康益处。然而,代谢工程大肠杆菌中 2'-FL 的生物合成常受限速酶 α-1,2-岩藻糖基转移酶(FucT2)不溶和不稳定限制。本研究旨在通过提高幽门螺杆菌 FucT2 的可溶表达增强 2'-FL 生产。由于 FucT2 结构未知,作者采用蛋白溶解度生物传感器,...

Engineering ClpS for selective and enhanced N-terminal amino acid binding.

Applied microbiology and biotechnology 2019 Tullman J, Callahan N, Ellington B, Kelman Z 等 5 人

单分子蛋白质测序的核心挑战之一,是对肽链中特定氨基酸进行高保真顺序识别与检测。N端规则通路适配蛋白ClpS可天然识别肽链N端氨基酸(NAA),野生型对N端Phe具有较高特异性但亲和力有限,同时也能识别Trp、Tyr和Leu。本研究采用定向进化方法,筛选对Phe和Trp具有更高亲和力与选择性的ClpS变体。以根癌农杆菌ClpS2为骨架...