Optimizing PH Domain-Based Biosensors for Improved Plasma Membrane PIP
磷脂酰肌醇结合蛋白的Pleckstrin同源（PH）结构域既能结合磷脂也能结合蛋白，常限制其作为特异性脂质生物传感器的应用。本研究在蛋白激酶B（Akt）和磷脂酰肌醇通用受体1（GRP1）的PIP3特异性PH结构域中引入定点突变，破坏蛋白介导相互作用而保留脂质结合，以提高对PIP3的传感特异性，并评估其对质膜定位和脂质追踪能力的影响。...
AIMTOR, a BRET biosensor for live imaging, reveals subcellular mTOR signaling and dysfunctions.
mTOR 信号是细胞感知营养、生长因子和能量状态的关键通路。本文报道了一种高灵敏度的基因编码生物发光共振能量转移（BRET）生物传感器 AIMTOR，用于在活细胞中实时监测 mTORC1 活性。该传感器由 YPET 荧光受体、ULK1 衍生 T757 磷酸化底物肽、WW 结构域和 NanoLuc 生物发光供体组成，mTORC1 磷酸...
Measurement of ATP concentrations in mitochondria of living cells using luminescence and fluorescence approaches.
ATP是细胞能量代谢的核心代谢物，也是细胞内信号分子，其浓度变化与细胞功能、活力和命运密切相关。本文介绍两种基于遗传编码生物传感器的活细胞ATP检测方法：萤火虫荧光素酶生物发光法和ATeam FRET荧光生物传感器。前者利用线粒体靶向萤火虫荧光素酶（mtLuc）在细胞内催化荧光素（luciferin）、ATP和O2反应，生成激发态o...
An enhanced chimeric firefly luciferase-inspired enzyme for ATP detection and bioluminescence reporter and imaging applications.
萤火虫荧光素酶通过高度特异的ATP依赖过程发射可见光，已广泛用于基因报告、全细胞生物传感器测量和活体成像。作者此前报道了一种嵌合酶，其N端来自Photinus pyralis荧光素酶，C端来自Luciola italica荧光素酶，具有约2倍增强活性和1.4倍更高生物发光量子产率。随后作者鉴定出5个基于L. italica的氨基酸改...
REV, A BRET-Based Sensor of ERK Activity.
细胞信号网络在环境刺激下被激活，其特异性取决于下游通路在时间和空间上的动态整合。为解析单一信号通路的动态调控，研究者开发了多种活细胞生物传感器。生物发光共振能量转移（BRET）技术因无需荧光激发、信噪比高，特别适合监测活细胞中的蛋白互作或构象变化。细胞外调节激酶（ERK）广泛表达并参与增殖、分化、神经可塑性、存活和凋亡等多种功能，其...