蛋白激酶在调控细胞过程中发挥关键作用，实时可视化其活性对理解信号动态至关重要。基因编码荧光生物传感器已成为研究激酶活性的有力工具，但由于缺乏合适底物肽，许多激酶的传感器开发仍具挑战。本文提出一种鉴定肽底物的新方法，并通过开发蛋白激酶N（PKN）活性传感器验证其有效性。该方法鉴定出一条新的PKN底物肽，并优化用于荧光传感器设计。所得传...
蛋白激酶C（PKC）家族由三个调控方式不同的亚家族组成，长期以来被认为是多种细胞功能的关键。然而，PKC 酶在不同亚细胞位置如何被调控，尤其是在内质网、溶酶体和 Par 信号复合体等新兴信号枢纽，仍不清楚。本文报道了一种高灵敏度的激发比率型 C 激酶活性报告器 ExRai-CKAR2，可检测亚细胞 PKC 活性的微小变化。将 ExR...
CDK6激酶与CDK4共同调控G1期细胞周期进程，但在转录、血管生成和代谢中具有细胞、组织和发育特异性功能。尽管CDK6是潜在肿瘤生物标志物和治疗靶点，目前仍缺乏在复杂环境中评估其活性的方法。本研究报道了一种源自6-磷酸果糖激酶（PFKP）的荧光肽生物传感器CDKACT6，通过荧光强度敏感变化报告CDK6激酶活性。该传感器可剂量依赖...
蛋白激酶表达与活性增强是肿瘤细胞增殖和癌症进展的关键，相关激酶形成复杂互作网络。为评估激酶抑制剂对信号网络的影响，作者建立了基于荧光共振能量转移（FRET）生物传感器的高内涵成像方法，用于在两种三阴性乳腺癌（TNBC）细胞系 HCC1806 和 Hs578T 中定量检测 ERK 和 AKT 活性。首先利用 EGF 刺激及不同 MEK...
细胞周期蛋白依赖性激酶（CDKs）在细胞周期进程和转录调控中起关键作用，其过度激活与癌症相关。然而，在生理背景下连续、敏感地测量其活性或药物抑制的方法有限。为此，作者设计了一种模块化荧光蛋白生物传感器CDKACT，通过CDK/周期蛋白磷酸化引起荧光强度实时变化来报告激酶活性。该传感器由组蛋白H1来源的CDK底物肽序列（引入唯一半胱氨...
基于荧光蛋白（FP）的生物传感器可实时监测活细胞内酶活性，但第一代 FRET 型激酶传感器通常荧光响应较低，优化过程费时费力。本文报道利用高通量大肠杆菌菌落筛选策略优化激酶 FRET 生物传感器。作者构建 pUADE 双表达质粒，在 Ptac 启动子下表达传感器变体，在 PBAD 启动子下表达组成型激酶；通过 L-阿拉伯糖诱导激酶表...