Sensitive and specific detection of ligands using engineered riboswitches.
核糖开关是位于信使RNA非编码区的RNA调控元件，可通过配体诱导的构象变化调控基因表达。由于它们通常能高亲和、高特异结合小分子配体，因此具有作为体外传感器的潜力。在枯草芽孢杆菌等革兰阳性菌中，嘌呤核苷酸合成受结合鸟嘌呤的核糖开关调控。本研究改造枯草芽孢杆菌xpt-pbuX鸟嘌呤核糖开关，将其用于荧光淬灭检测体系，从而在体外特异性检测...
Gauging and Visualizing c-di-GMP Levels in Pseudomonas aeruginosa Using Fluorescence-Based Biosensors.
近期研究表明，环二鸟苷酸（cyclic di-GMP, c-di-GMP）是细菌中重要的第二信使，调控多种生理功能，尤其作为黏附和生物膜形成的正调控因子受到广泛关注。深入了解其调控机制有助于开发工业和医疗环境中控制生物膜的策略。因此，在特定条件或特定突变株中测量细菌 c-di-GMP 水平具有重要意义。作者开发了一系列基于荧光的 c...
Next-generation RNA-based fluorescent biosensors enable anaerobic detection of cyclic di-GMP.
细菌分布于氧气可利用性不同的多种生态位，厌氧环境如哺乳动物消化道和工业反应器中存在大量专性和兼性厌氧菌，在人类健康与生物制造中发挥重要作用。然而，由于缺乏适合活细胞成像的工具，研究细菌在部分或完全厌氧条件下的功能具有挑战性。本文报道了一系列基于 RNA 的荧光生物传感器，可选择性响应细菌胞内第二信使环二鸟苷酸（cyclic di-G...
Live Cell Imaging Using Riboswitch-Spinach tRNA Fusions as Metabolite-Sensing Fluorescent Biosensors.
开发荧光生物传感器的主要动机是实时监测细胞内代谢物水平。大多数可遗传编码的荧光传感器基于受体蛋白与荧光蛋白结构域的融合，但许多小分子代谢物缺乏已知蛋白受体，且基于蛋白受体的FRET传感器工程化困难。近年来，小分子结合核糖开关通过与体外筛选的Spinach适配体融合，被改造为荧光生物传感器；Spinach可结合前荧光、细胞可渗透的GF...
In vitro analysis of riboswitch-Spinach aptamer fusions as metabolite-sensing fluorescent biosensors.
荧光生物传感器的发展旨在实时监测活细胞中特定代谢物水平。常见策略包括将蛋白受体与荧光蛋白融合，或合成小分子反应探针；天然代谢物感应核糖开关也曾用于报告基因系统。近期研究表明，将核糖开关适配体与体外筛选的 Spinach 适配体融合，可构建 RNA 荧光生物传感器，其中 Spinach 结合细胞可渗透的条件荧光分子 DFHBI。本文描...
Rational design of fluorescent biosensor for cyclic di-GMP.
环二鸟苷酸（c-di-GMP）是细菌中调控毒力表达、生物膜形成等过程的重要第二信使，其胞内水平由 GGDEF 结构域二鸟苷酸环化酶（DGC）合成和 EAL/HD-GYP 结构域磷酸二酯酶（PDE）降解共同控制。目前体外检测 DGC/PDE 酶活多依赖放射性标记 c-di-GMP 或 HPLC，操作复杂且通量低。本文基于铜绿假单胞菌 ...