Nature communications
2021
Gamiz-Arco G, Gutierrez-Rus LI, Risso VA, Ibarra-Molero B 等 14 人
糖苷酶是广泛分布于不同生物类群中、负责切割糖苷键的重要酶类。本文报道了一种细菌和真核生物第1家族糖苷酶(GH1)假想祖先蛋白的异常性质。该祖先蛋白与现代后代具有相同的TIM桶折叠,但结构中存在大范围显著增强的构象柔性;与此同时,桶状核心仍相对刚性,祖先糖苷酶活性稳定,最适温度位于嗜热第1家族糖苷酶的实验范围内。在约1400种现代糖苷...
Methods in molecular biology (Clifton, N.J.)
2017
Clifton BE, Whitfield JH, Sanchez-Romero I, Herde MK 等 7 人
基于 Förster 共振能量转移(FRET)的小分子生物传感器可在复杂细胞环境中以高时空分辨率监测小分子信号。FRET 传感器通常由一对荧光蛋白与合适的识别域(如溶质结合蛋白 SBP 超家族成员)融合构建。然而,天然 SBP 热稳定性低,可能限制生理条件下成像;其 N/C 端位置也可能不利于荧光蛋白融合,从而限制传感器动态范围。本...
Protein science : a publication of the Protein Society
2015
Whitfield JH, Zhang WH, Herde MK, Clifton BE 等 8 人
信号分子生物传感器可结合蛋白工程、荧光成像与细胞生物学,用于研究生理过程。遗传编码生物传感器的构建通常依赖既特异又稳定的结合核心,再与荧光分子偶联形成传感元件;但自然界中常缺乏满足要求的结合蛋白,且现有传感器在稳定性方面仍需改进。祖先蛋白重建是一种可产生高稳定性功能蛋白的蛋白工程方法。本研究以 L-精氨酸为对象,利用祖先蛋白重建与环...