Protocol for measuring cell cycle Zn
细胞内可交换锌离子池并非静态，既会响应外界扰动，也会随细胞周期自然波动。本文提供一套基于荧光共振能量转移（FRET）生物传感器进行长时程活细胞成像的实验方案，用于监测表达胞质锌传感器 NES-ZapCV2 的 MCF10a 细胞中游离/不稳定锌（labile Zn2+）的动态变化。方案包括细胞培养与维持、Zn2+ 控制最低培养基（M...
Revealing β-TrCP activity dynamics in live cells with a genetically encoded biosensor.
F-box蛋白β-转导重复蛋白（β-TrCP）是SCF E3泛素连接酶复合物的底物适配体，在细胞生理中起关键作用，并在多种癌症中常发生失调。本文开发了一种荧光生物传感器，用于在活单细胞中实时定量测量β-TrCP活性。研究发现，β-TrCP在整个细胞周期中保持组成型活性，并维持其底物处于明确的稳态水平。β-TrCP表达水平与其活性之间...
Intravital imaging technology guides FAK-mediated priming in pancreatic cancer precision medicine according to Merlin status.
胰腺导管腺癌（PDAC）高度转移且对化疗耐药，其致密促纤维增生基质可调节肿瘤进展。本研究在小鼠和患者来源 PDAC 模型中，利用基于 FAK 的 Förster 共振能量转移（FRET）生物传感器进行活体荧光寿命成像显微镜（FLIM）检测，实时可视化短暂调控黏着斑激酶（FAK）所介导的双向细胞-环境信号。同时，利用 FUCCI 细胞...
Live Imaging and Analysis of Cilia and Cell Cycle Dynamics with the Arl13bCerulean-Fucci2a Biosensor and Fucci Tools.
细胞周期与纤毛周期通过中心粒在纤毛基体和有丝分裂中心体中的双重功能紧密偶联，但纤毛组装与去纤毛如何与细胞周期进程协调，以及纤毛长度和远端尖端脱落频率如何随细胞周期阶段变化，在许多细胞类型和发育过程中仍不清楚。为此，作者开发了Arl13bCerulean-Fucci2a三顺反子纤毛与细胞周期生物传感器。该报告系统无需外部刺激，即可在群...
Temperature-Induced uncoupling of cell cycle regulators.
早期发育包含可重复且对环境波动稳健的复杂形态变化序列。为研究可重复性与稳健性的关系，作者在不同温度下检测果蝇早期胚胎的细胞周期进展。结果显示，在 5–35°C 范围内，细胞周期各步骤的划分总体保守，但各步骤的相对持续时间随温度变化。低温下进入前中期的时间相对其他细胞周期事件明显延迟，提示其受不同于其他步骤的调控机制控制。作者利用活体...
A Cell/Cilia Cycle Biosensor for Single-Cell Kinetics Reveals Persistence of Cilia after G1/S Transition Is a General Property in Cells and Mice.
纤毛与细胞周期通过共享的中心粒/基体机制紧密偶联。中心粒在纤毛基体中成核纤毛轴丝，并在中心体处隔离周中心粒基质以组织有丝分裂纺锤体；纤毛可响应生长信号，触发纤毛回缩和细胞周期再进入。本文报道一种荧光纤毛/细胞周期生物传感器，可在细胞和诱导型小鼠中同时标记细胞周期阶段与纤毛组装/解聚动力学，实现活体成像。该三顺反子报告系统包含 ARL...
PLK1 Activation in Late G2 Sets Up Commitment to Mitosis.
有丝分裂进入必须与DNA复制完成紧密协调以维持基因组完整性。此前研究已证明晚期G2期CyclinB1-Cdk1的及时激活触发有丝分裂进入，但其上游调控机制仍不清楚。本文报道Polo样激酶1（Plk1）在正常细胞周期中进入有丝分裂所必需，并在CyclinB1-Cdk1激活前不久被快速激活。作者利用活细胞成像、Plk1抑制剂、化学遗传学...
A FRET biosensor reveals spatiotemporal activation and functions of aurora kinase A in living cells.
AURKA过表达是上皮癌的重要标志。其编码多功能丝氨酸/苏氨酸激酶Aurora A，该激酶在中期被激活并参与细胞周期进程；在活细胞中评估其激活状态对下一代药物设计至关重要。本文报道一种Förster共振能量转移（FRET）生物传感器，用于检测Aurora A激酶在Thr288位点自磷酸化所诱导的构象变化。该传感器由EGFP供体、全长...
An APC/C-Cdh1 Biosensor Reveals the Dynamics of Cdh1 Inactivation at the G1/S Transition.
B型周期蛋白依赖性激酶活性必须在有丝分裂退出和G1稳定时关闭。B型周期蛋白的降解由后期促进复合物/环体（APC/C）介导；在有丝分裂退出期间及之后，APC/C依赖Cdh1。Cdh1又在新细胞周期Start转换时被周期蛋白-CDK磷酸化并失活。我们开发了一种生物传感器，用于评估APC/C-Cdh1的细胞周期动态。G1转录抑制因子Whi...
Spatiotemporal Investigation of Phosphorylation Events During Cell Cycle Progression.
Polo-like kinase 1（Plk1）是细胞进入分裂期及完成有丝分裂所必需的激酶，但其在G2/M期精确调控Cdc25C磷酸酶（Cyclin B1-Cdk1激活剂）的分子事件和时空机制仍不清楚。为实时解析Cdc25C在细胞周期中的磷酸化动态，作者构建了遗传编码的FRET（Förster共振能量转移）磷酸化生物传感器。该传感器...
Spatial Separation of Plk1 Phosphorylation and Activity.
Polo-like kinase 1（Plk1）是控制有丝分裂和细胞分裂的关键激酶。Plk1 在 S 期首先被招募到中心体，在 G2 晚期出现在动粒上，并在有丝分裂末期转位至中央纺锤体。Plk1 的激活需要 Aurora A 对其 T210 位点进行磷酸化，该过程依赖共因子 Bora。然而，关于 Plk1 最初在何处被激活存在争议：...
Enrichment of the β-catenin-TCF complex at the S and G2 phases ensures cell survival and cell cycle progression.
Wnt/β-catenin 信号通过 β-catenin/TCF 复合物在组织稳态中发挥关键作用。Wnt 刺激使核内 β-catenin/TCF 复合物积累，并通过靶基因转录调控细胞存活、增殖与分化。与 G1 期相比，G2 期 LRP6 受体激活和胞质 β-catenin 均上调，但 Wnt 通路负调控因子 AXIN2 也在此期积累...
Progressive activation of CyclinB1-Cdk1 coordinates entry to mitosis.
CyclinB1-Cdk1激酶是有丝分裂促进因子（MPF）的核心催化活性，但其在哺乳动物细胞中何时以及以何种速度激活仍不清楚。作者开发了一种特异性识别CyclinB1-Cdk1的FRET生物传感器，可在活人细胞中以高时间分辨率检测其激酶活性。该传感器由mCerulean供体、YPet受体、CyclinB1自磷酸化位点连接肽和Plk1...