A Novel ELISA-Based Peptide Biosensor Assay for Screening ABL1 Activity
ABL1 酪氨酸激酶通路异常激活在 BCR-ABL1 样急性淋巴细胞白血病中具有重要致病作用，酪氨酸激酶抑制剂可为常规化疗反应不佳的患者提供治疗选择。本研究报道一种新型肽生物传感器（PABL）-ELISA 方法，用于在体外检测四种不同遗传背景的永生化白血病细胞系中的 ABL1 活性。PABL 序列包含 ABL1 酪氨酸磷酸化位点和提...
Nanobiosensor Reports on CDK1 Kinase Activity in Tumor Xenografts in Mice.
探测细胞内蛋白激酶动态并定量其活性，是理解协调细胞生长与分裂、并在过度增殖和病理状态中作为生物标志物及药物靶点的分子机制的重要挑战。本文报道了有丝分裂激酶 CDK1 纳米生物传感器的工程化构建与表征：通过碳纳米管多功能化，在其表面连接 CDK1 特异性荧光肽报告子。该原创性 CDK1 活性报告子将荧光生物传感器的高敏感性与碳纳米管独...
Epigenetic Process Monitoring in Live Cultures with Peptide Biosensors.
乙酰转移酶属于转移酶，负责将乙酰基从乙酰辅酶A转移到组蛋白赖氨酸残基的氨基。以往组蛋白乙酰化监测多依赖生化分析，无法以动态形式提供时空信息。本文提出一种新方法，利用时间相关单光子计数荧光寿命成像（TCSPC-FLIM）结合肽生物传感器，在活单细胞中监测乙酰转移酶的乙酰化活性。基于2D和3D培养体系，作者证明该肽传感器能够以荧光寿命依...
Real-Time Multiplex Kinase Phosphorylation Sensors in Living Cells.
磷酸化是参与细胞信号转导与调控的重要翻译后修饰，但现有研究蛋白激酶磷酸化的方法往往缺乏时空分辨率，且难以在活细胞中同时实时观察多种激酶的活性。本文提出一种肽生物传感器策略，并结合时间相关单光子计数-荧光寿命成像（TCSPC-FLIM），在活体二维和三维细胞培养模型中以单细胞分辨率实时探测 VEGFR-2 和 AKT 的磷酸化活性。作...
A time-resolved luminescence biosensor assay for anaplastic lymphoma kinase (ALK) activity.
本研究开发了一种用于间变性淋巴瘤激酶（ALK）活性的新型时间分辨发光生物传感器检测方法。作者采用简便策略，将已知 ALK 底物改造为肽生物传感器 ALAStide，使其在 ALK 磷酸化后可敏化铽离子（Tb3+）发光。未磷酸化肽对 Tb3+ 发光无明显贡献，磷酸化后发光增强约5.5倍，形成分析基础。通过 Job 法和结合实验确定 p...
A peptide-based biosensor assay to detect intracellular Syk kinase activation and inhibition.
脾脏酪氨酸激酶（Syk）与癌症、类风湿关节炎等多种疾病相关，但其复杂自磷酸化、支架蛋白及底物磷酸化使其功能难以明确。为直接检测完整细胞内 Syk 的催化活性与抑制，作者开发了一种 Syk 特异性人工肽生物传感器 SAStide。该肽由 Syk 底物偏好基序衍生序列与细胞穿透肽组成，可在活细胞内以 Syk 依赖方式被磷酸化，从而作为 ...