Engineering and application of LacI mutants with stringent expressions.
理想的转录调控回路应在无诱导剂时保持沉默，并在加入效应物后具有宽诱导动态范围。大肠杆菌 lac 操纵子启动子 Plac 因 LacI 对操纵子亲和力中等而存在泄漏表达。本研究通过定向进化改造 LacI 调控蛋白，获得携带 I79T 和 N246S 突变的 M7 突变体。与野生型 LacI 相比，M7 使 lac 启动子泄漏表达降低约...
Biosensor-driven, model-based optimization of the orthogonally expressed naringenin biosynthesis pathway.
合成生物学工具箱的发展使复杂生物合成通路的优化策略更加智能化。多基因通路可被划分为若干模块，并通过动态调控精细调节各模块表达，以适应细胞环境变化。为避免模块间干扰及宿主调控系统影响，前期工作开发了用于可调正交基因表达的 σ 因子工具箱。本文将该工具箱应用于大肠杆菌，正交表达并精细调节柚皮素（naringenin）异源生物合成通路。为...
Transportome-wide engineering of Saccharomyces cerevisiae.
合成生物学使重组微生物能够生产用于医药、食品和材料的小分子。产物分泌可降低分离纯化成本，但由于对转运蛋白功能理解有限，工程化改造具有挑战性。本文描述了一种全基因组转运体敲除方法，结合代谢物生物传感器，可在酿酒酵母中鉴定影响特定目标代谢物生产的转运体。作者将该方法应用于外源化合物顺,顺-粘康酸（CCM）、原儿茶酸（PCA）和甜菜红素的...
Iterative screening methodology enables isolation of strains with improved properties for a FACS-based screen and increased L-DOPA production.
为优化微生物宿主以大规模生产高价值代谢物，常需对宿主基因组进行多轮突变与改造。本文报道了一种基于流式细胞分选（FACS）富集 L-DOPA 酶联生物传感器的三轮筛选策略，用于提高酿酒酵母中 L-DOPA 产量。该方法仅构建一次带条形码的体外转座子介导基因破坏文库，并通过同源重组将同一文库整合到每轮更新后的背景菌株中，从而避免每轮重新...