Design and evaluation of a real-time activity probe for focal adhesion kinase.
聚焦黏附激酶（FAK）是转移性癌症的潜在治疗靶点。本文报道了一种用于 FAK 的直接荧光活性探针的设计、合成与优化，并将其应用于 FAK 抑制剂筛选。作者发现，磷酸化敏感磺酰胺氧喹啉荧光团（Sox）在肽链中的位置会显著影响 FAK 肽探针性能。优化后的 FAKtide-S2 探针在实时荧光活性检测中重现性高（Z′=0.91），可检测...
A real-time, fluorescence-based assay for Rho-associated protein kinase activity.
肝细胞癌（HCC）转移表型可通过抑制Rho相关蛋白激酶（ROCK）酶活性而减轻。本文报道了一种用于直接检测ROCK活性的荧光探针的设计、合成与评价。该探针采用磷酸化敏感的磺酰胺氧啉（Sox）荧光基团，当邻近氨基酸被磷酸化时，通过螯合增强荧光（CHEF，激发360 nm、发射485 nm）使荧光增强，从而可直接实时监测肽底物磷酸基团加...
Monitoring the Activation of the DNA Damage Response Pathway in a 3D Spheroid Model.
在药物评价中，多细胞肿瘤球体等三维模型具有重要价值，但监测其中 DNA 损伤响应（DDR）通路的激活仍是挑战。本文报道了一种荧光生物传感器 DDR-Act-FP，通过监测 p21 启动子的 p53 依赖性激活来检测 DDR 激活。作者将 p21/CIP1 启动子驱动的 mRFP 荧光蛋白报告系统稳定导入 HCT116 细胞，证明表达...
Conjugated Polythiophene for Rapid, Simple, and High-Throughput Screening of Antimicrobial Photosensitizers.
本文报道了一种阳离子共轭聚噻吩聚[3-(3′-N,N,N-三乙氨基-1′-丙氧基)-4-甲基-2,5-噻吩盐酸盐]（PMNT），并将其用于光动力抗菌化疗（PACT）光敏剂（PSs）的高通量筛选。PMNT 能够依据不同的荧光猝灭效率对细菌数量进行定量检测。当体系中存在无效光敏剂时，光动力灭活细菌的效率较低，细菌会呈指数生长，并通过静电...
Large Scale Bacterial Colony Screening of Diversified FRET Biosensors.
基于荧光蛋白突变体之间 Förster 共振能量转移（FRET）的生物传感器已广泛用于生理学与生物化学研究，但许多 FRET 传感器在亚最优实验条件下 FRET 变化较小，测量困难。当前领域的重要任务之一是开发新的优化策略。本文报道了通过细菌菌落大规模筛选突变体 FRET 传感器文库来优化 FRET 变化的方法。作者优化了传感器表达...
Genetically assembled fluorescent biosensor for in situ detection of bio-synthesized alkanes.
构建高效微生物细胞工厂生产可替代生物燃料烷烃的主要瓶颈之一是缺乏快速检测烷烃的方法。本文开发了一种遗传组装的荧光生物传感器，用于快速、原位监测重组大肠杆菌细胞内烷烃合成。作者将来自 Acinetobacter baylyi ADP1 的烷烃响应调控蛋白 AlkR 与 PalkM 启动子，以及来自 Pseudomonas oleovo...
A cAMP Biosensor-Based High-Throughput Screening Assay for Identification of Gs-Coupled GPCR Ligands and Phosphodiesterase Inhibitors.
环磷酸腺苷（cAMP）是重要的第二信使，胞内 cAMP 水平定量是 G 蛋白偶联受体（GPCR）研究的关键。Gs 或 Gi 偶联 GPCR 激活腺苷酸环化酶（AC）后，分别升高或降低胞内 cAMP。本文建立了一种基于 Förster 共振能量转移（FRET）的实时 cAMP 高通量筛选（HTS）检测法，用于在活细胞中鉴定和表征 Gs...
A time-resolved luminescence biosensor assay for anaplastic lymphoma kinase (ALK) activity.
本研究开发了一种用于间变性淋巴瘤激酶（ALK）活性的新型时间分辨发光生物传感器检测方法。作者采用简便策略，将已知 ALK 底物改造为肽生物传感器 ALAStide，使其在 ALK 磷酸化后可敏化铽离子（Tb3+）发光。未磷酸化肽对 Tb3+ 发光无明显贡献，磷酸化后发光增强约5.5倍，形成分析基础。通过 Job 法和结合实验确定 p...