基于ArsR的全细胞生物传感器可灵敏比色检测亚砷酸盐[As(III)]，但对亚锑酸盐[Sb(III)]的宽泛响应限制现场特异性。Comamonas testosteroni JL40的ant操纵子通过外排ATP酶AntA、金属伴侣蛋白AntC和调控蛋白AntR赋予Sb(III)选择性抗性。作者将antA、antC及三个antR同源基...
用于砷污染检测的全细胞生物传感器通常基于天然细菌感知系统构建，但难以精确调控遗传响应。启动子设计是解决该问题的关键途径之一。本研究以大肠杆菌MG1655中砷响应性的ArsR-Pars调控系统作为识别元件，并连接gfp或lacZ报告基因，构建用于表征重构启动子的遗传电路。首先分析ArsR结合位点（ABS）和RNA聚合酶结合位点库，挖掘...
有机砷和无机砷均可能危害人体健康。尽管有机砷毒性通常低于无机砷，但其在环境中可通过化学和生物过程转化为无机砷，因此发展有机砷检测工具具有重要意义。基于砷响应遗传系统的生物传感器通常由识别砷的调控蛋白 ArsR 控制，因此可通过改造 ArsR 的选择性来改变生物传感器的目标选择性。本研究通过遗传工程改造 ArsR，将大肠杆菌（E. c...
本文提出一种用于筛选砷响应转录调控因子的正负双选择系统。首先，作者构建了以大肠杆菌 BL21(DE3) 为宿主、以 ArsR 转录调节蛋白和 GFP 报告基因为核心的全细胞生物传感器，用于检测液相样品中的亚砷酸盐 As(III)。该传感器采用双质粒系统：pET29-arsR 在 T7 启动子控制下表达 ArsR，pACYC-gfp ...
许多微生物的强金属抗性与其携带多个金属抗性操纵子有关。铜绿假单胞菌 KT2440 是研究此类微生物的模型，其砷抗性由两个同源砷抗性操纵子 ars1 和 ars2 编码的蛋白共同介导，两个操纵子分别含转录调控子 ArsR1 和 ArsR2。本文显示，纯化的 ArsR1 和 ArsR2 能以约 30 μM 的相似亲和力结合三价砷（亚砷酸...
合成基因线路中的表达控制常受背景泄漏限制，难以在保持极低背景的同时获得高输出，这制约了高灵敏度生物传感器的构建。本文证明，在可调控启动子中引入辅助转录因子结合位点，可显著提高原核生物传感器电路的信噪比。以大肠杆菌 ArsR 阻遏蛋白及其操纵子为例，将额外的 ArsR 操纵子置于目标启动子下游，可呈距离依赖方式形成转录路障，降低下游报...