A biosensor for measuring NAD
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）水平调控细胞代谢与信号，其降低与多种疾病及生理衰老相关，因此亟需可在床旁使用的快速定量方法。本文报道一种用于快速定量生物样品中 NAD+ 水平的生物发光生物传感器。该传感器为半合成发光传感蛋白，由脱氢酶 sepiapterin reductase（SPR）、NanoLuc 荧光素酶（NLuc）和自标记...
Subcellular Characterization of Nicotinamide Adenine Dinucleotide Biosynthesis in Metastatic Melanoma by Using Organelle-Specific Biosensors.
NAD+在正常与病理过程中发挥核心作用，抑制其合成可用于包括黑色素瘤在内的癌症治疗。为在活细胞中定量NAD+水平并解析NAD+合成的区室化问题，本研究采用近期报道的遗传编码NAD+荧光生物传感器LigA-cpVENUS，将其靶向BRAF-V600E突变的A375转移性黑色素瘤细胞的细胞质、线粒体和细胞核。以NAMPT特异性抑制剂FK...
Flow Cytometry Analysis of Free Intracellular NAD
本文描述将流式细胞术与遗传编码靶向荧光生物传感器相结合，用于测定哺乳动物细胞内氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）在亚细胞区室中的可用性。游离NAD+的局部浓度会影响依赖NAD+的酶，如sirtuin去乙酰化酶、PARP/ARTD家族成员和环状ADPR水解酶家族成员。许多现有方法难以将各亚细胞区室中的游离NAD+与蛋白结合态NAD...
Methods for Using a Genetically Encoded Fluorescent Biosensor to Monitor Nuclear NAD<sup/>.
游离烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）是NAD+消耗酶的底物，其局部浓度可影响PARP/ARTD和sirtuin等酶活性。本章介绍利用基因编码荧光生物传感器测量亚细胞区室NAD+浓度的方法，并讨论该传感器的局限性与潜在应用。内容包括：（1）基于磁珠的方法校准仪器与实验装置；（2）在细胞中设置必要对照并正确进行比率荧光测量；（3）采用适...
Biosensor reveals multiple sources for mitochondrial NAD⁺.
烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）是去乙酰化酶（sirtuins）和多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶（PARPs）等 NAD+ 消耗酶的关键底物，这些酶分布于细胞核、胞质和线粒体。亚细胞区室中 NAD+ 浓度的波动被认为可调节相应酶活性，但长期以来缺乏直接测量细胞内区室化游离 NAD+ 的方法。本文报道了一种基因编码荧光生物传感器，用于直接监...