Development of FRET Biosensor to Characterize CSK Subcellular Regulation.
C-terminal Src kinase（CSK）是Src家族激酶（SFKs）的主要抑制性激酶，通过磷酸化其C端酪氨酸位点调控多种细胞活动。作为胞质蛋白，CSK需被招募至质膜以调控SFKs活性，但其活性调控机制和亚细胞定位仍不清楚。本研究开发了一种基于荧光共振能量转移（FRET）的基因编码生物传感器，用于在活细胞中可视化CSK活性...
A biosensor of SRC family kinase conformation by exposable tetracysteine useful for cell-based screening.
我们开发了一种在活细胞中区分不同蛋白构象的新方法——可暴露四半胱氨酸（XTC）。该方法将工程化四半胱氨酸基序引入目标蛋白，使其根据构象状态有条件地暴露于双砷染料结合。XTC用于区分Src家族激酶的开放与关闭调控构象。仅在c-Src、Lck和Lyn三个Src家族激酶保守SH2域中将四个残基替换为半胱氨酸，即可基于与双砷染料FlAsH或...
A biosensor generated via high-throughput screening quantifies cell edge Src dynamics.
活细胞荧光生物传感器通常需要繁琐优化，且依赖具有合适靶标特异性的天然配体。本文报道了一种基于工程化纤连蛋白III型单体（FN3 monobody）支架的荧光生物传感器，可通过高通量筛选改造为结合不同靶标的探针。作者以特异性识别激活态Src家族激酶（SFK）的monobody 1F11为基础，在其表面连接一种亮的环境敏感荧光染料，使染...