Engineering of the Ligand Specificity of Transcriptional Regulator XylS by Deep Mutational Scanning.

ACS synthetic biology 2022 Ogawa Y, Katsuyama Y, Ohnishi Y

深度突变扫描是一种蛋白质工程方法。本文将其应用于改变假单胞菌 Pseudomonas putida 转录调控因子 XylS 的配体特异性，使其识别 p-甲苯酸而非天然配体 m-甲苯酸。为此，作者使用基于抗生素抗性基因的双筛选系统，构建 xylS 突变库，将推测配体结合域（1–213 位，除第 7 位外）的每个密码子随机化，产生所有可...

全细胞生物传感器 深度突变扫描XylS配体特异性甲苯酸

Switching the Ligand Specificity of the Biosensor XylS from

ACS synthetic biology 2019 Ogawa Y, Katsuyama Y, Ueno K, Ohnishi Y

假单胞菌 XylS 转录激活因子在苯甲酸类效应物存在下诱导 Pm 启动子转录，间甲苯酸最有效，对甲苯酸较弱。为改变其效应物特异性，作者在 E. coli 中建立双选择系统：Pm 启动子控制 bla 和 tetR，tet 启动子控制 cat。氨苄青霉素抗性用于正选择，富集识别目标配体的 XylS 突变体；氯霉素敏感性用于负选择，排除识...

全细胞生物传感器 XylS定向进化双选择系统对甲苯酸