ACS synthetic biology
2022
Ogawa Y, Katsuyama Y, Ohnishi Y
深度突变扫描是一种蛋白质工程方法。本文将其应用于改变假单胞菌 Pseudomonas putida 转录调控因子 XylS 的配体特异性，使其识别 p-甲苯酸而非天然配体 m-甲苯酸。为此，作者使用基于抗生素抗性基因的双筛选系统，构建 xylS 突变库，将推测配体结合域（1–213 位，除第 7 位外）的每个密码子随机化，产生所有可...
Nature communications
2021
为优化生物技术与制药用途的蛋白表达与折叠，本文报道了一种双报告生物传感器系统，可在单细胞水平同时评估大肠杆菌内源蛋白的翻译与折叠状态，从而快速筛选突变库。该系统由翻译偶联报告模块和热休克响应折叠报告模块组成：目标蛋白完整翻译时驱动 mCherry 表达，错误折叠或包涵体形成时通过 RpoH/σ32 激活 IbpA 启动子表达不稳定 ...
Methods in enzymology
2020
Scott LH, Mathews JC, Filipovska A, Rackham O
仅凭三维结构难以完全揭示蛋白质的固有功能属性，系统分析突变蛋白变体可提供关键信息。深度突变扫描可在单次实验中同时分析数百万种蛋白变体的功能，但必须将突变基因型与可选择的表型相耦合。本章概述如何在酿酒酵母中构建人工遗传回路，以维持基因型—表型联系，从而实现该策略的通用应用。文中描述了在酵母中设计遗传选择、构建突变蛋白库以及分析测序数据...