许多神经退行性疾病伴随持续细胞应激并改变细胞信号。为研究相关突变如何影响细胞应激与信号，作者建立了用于内质网（ER）介导细胞应激和第二信使信号的活细胞检测。首先检测视紫红质突变对 ER 应激和 Ca2+ 信号的影响：常染色体显性视网膜色素变性最常见突变 P23H 较野生型产生更高 ER 应激，且应激水平升高与 Ca2+ 信号减弱相关...
蛋白质相互作用常采用基于 Förster 共振能量转移（FRET）的定量分子显微镜研究。本研究将线性解混 FRET（lux-FRET）与基于 FRET 的环磷酸腺苷（cAMP）生物传感器 CEpac 联合应用，用于分析 5-HT7 受体（5-HT7R）与 5-HT1A 受体（5-HT1AR）之间的寡聚化及其对 cAMP 信号的重要性...
环磷酸腺苷磷酸二酯酶（PDE）是心脏β肾上腺素能受体（β-AR）信号的重要调节因子。PDE3通常被认为是大型哺乳动物和人心脏中的主要cAMP水解酶，而PDE4在啮齿动物中占优势，但其在大型哺乳动物中的功能仍不清楚。本研究以猪心这一相关临床前模型，探讨PDE4对cAMP水解和兴奋-收缩耦联（ECC）的作用。作者利用FRET生物传感器在...
心脏T管是膜内陷，对兴奋-收缩耦联至关重要。阿米替林等阳离子两亲性药物会干扰磷脂酰肌醇4,5-二磷酸（PI(4,5)P2）与维持管状系统连接细胞表面蛋白的相互作用。本研究旨在验证阿米替林作为心肌细胞新的去管剂。用di-4-ANEPPS染色成年大鼠心室肌细胞（ARVMs）显示，与甲酰胺不同，阿米替林诱导完全去管且不影响细胞活力。膜片钳...
钙离子-转录偶联控制血管平滑肌细胞（VSMC）表型相关基因表达，使正常收缩型VSMC在血管损伤后转为增殖型，参与修复并促进血管重塑、动脉粥样硬化和再狭窄。本文证明，对Ca2+和HCO3−敏感的可溶性腺苷酸环化酶（sAC）将人冠状动脉平滑肌细胞（hCASMCs）中的Ca2+内流与cAMP生成及CREB磷酸化联系起来。表达FRET型cA...
环磷酸腺苷（cAMP）是原核和真核生物中重要的第二信使，介导多种生物学功能。为研究 cAMP 信号及其调控，本文基于合成转基因方法开发了一种蛋白型 cAMP 报告系统。作者将大肠杆菌 cAMP 受体蛋白（CRP）与单纯疱疹病毒 VP16 转录激活域融合，构建哺乳动物表达载体 pLA1，形成人工哺乳动物反式激活因子；该因子可浓度依赖地...
钙调节的磷酸二酯酶1（PDE1）家族在脑中高表达，但其在神经元中的功能作用尚不清楚。本研究使用选择性 PDE1 抑制剂 Lu AF64196 和环核苷酸生物传感器（包括一种新型 cGMP 生物传感器），分析 PDE1 对新生雄性小鼠脑片单个神经元中 cAMP 和 cGMP 的影响。光释放笼化 NMDA 引起胞内钙短暂升高，并伴随纹状...