综述或非传感器论文 2008 非传感器论文

Characterizing the chemical complexity of patterned biomimetic membranes.

Biochimica et biophysica acta Vats K, Kyoung M, Sheets ED
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组成图示

Characterizing the chemical complexit... 传感器构成示意图

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传感器类型

综述或非传感器论文

检测对象

无明确分析物;研究对象为图案化仿生膜中脂质横向扩散(lateral lipid diffusion,di12:0 PC 中 bodipy PC 标记脂质);样品基质:玻璃支撑平面脂质双分子层(supported planar lipid bilayer)

检测原理

本文并非传感检测,而是图案化仿生膜表征。先在玻璃基底上沉积 Parylene C,蒸镀 100 nm 铝硬掩膜并涂布 Shipley 1827 正性光刻胶,经曝光、显影和反应离子刻蚀形成 Parylene C 图案;去除铝后,将含 bodipy PC 的 di12:0 PC 小单层囊泡(SUV)融合到暴露玻璃表面,去除 Parylene C 得到图案化流体相脂质畴,再回填含 diI-C16 的 di15:0 PC 凝胶相脂质。荧光显微镜通过两种荧光标记观察畴边界;共聚焦 FCS 检测 bodipy PC 荧光涨落,拟合自相关函数获得扩散时间、扩散系数和异常扩散指数 α。若回填凝胶相脂质掺入流体畴形成凝胶簇,则作为扩散障碍,使 α<1、D 降低;37 °C 超过 di15:0 PC 相变温度后凝胶簇消失,恢复布朗扩散。该过程无外源分析物浓度依赖的传感信号。

检测灵敏度

原文未报告 LOD、线性范围、灵敏度斜率或相关系数。

效应效果

图案化膜保留光罩特征尺寸,约 19±3% 图案具锐利边界且至少稳定 6 h,多数为弥散边界。FCS 显示图案化 di12:0 PC 畴异常扩散,D=(1.9±0.5)×10^-9 cm^2 s^-1,α=0.74±0.13;未图案化 di12:0 PC 为布朗扩散,D=(6.7±2.1)×10^-9 cm^2 s^-1。37 °C 下图案化畴恢复布朗扩散,D=(7.4±2.5)×10^-9 cm^2 s^-1。未图案化 di12:0 PC 膜与 di15:0 PC SUV 孵育后,25 °C 异常扩散 D=(4.6±0.9)×10^-9 cm^2 s^-1、α=0.79±0.06,37 °C 恢复 D=(7.9±2.9)×10^-9 cm^2 s^-1。AFM 显示刻蚀表面粗糙,XPS 确认 Parylene C 去除。作者认为其可作集成生物传感器构建模块,但需系统定量表征。

传感器的构成

  • 基底:玻璃载玻片/盖玻片,支撑平面脂质双分子层
  • 图案化脂质层:di12:0 PC 流体相磷脂,含 0.5 mol% bodipy PC 荧光类似物,形成图案化畴
  • 回填脂质层:di15:0 PC 凝胶相磷脂,含 0.5 mol% diI-C16 荧光类似物,填充畴间区域
  • 封样层:VALAP(凡士林:羊毛脂:石蜡,2:1:1 wt/wt),密封样品防止干燥
  • 制备掩膜层:Parylene C 图案膜,经光刻与 RIE 形成 lift-off 图案,最终去除
  • 硬掩膜层:100 nm 铝膜,防止氧等离子体刻蚀缺陷,最终去除
  • 光刻胶层:Shipley 1827 正性光刻胶,1.2 μm,转移光刻图案,最终去除

中文摘要

生物膜是复杂、异质且动态的系统,在细胞信号转导和膜运输等过程中发挥关键作用。模型膜可在受控环境中研究生物膜动力学。本文提出一种改良聚合物 lift-off 方法,通过构建由一种脂质组成(十二烷基磷脂酰胆碱,di12:0 PC)畴被另一种脂质组成(十五烷基磷脂酰胆碱,di15:0 PC)包围的图案化回填样品,向仿生膜中引入化学复杂性。采用荧光显微镜和荧光相关光谱(FCS)表征该图案化方法。结果显示存在两类畴:一类具有弥散边界,另一少数具有锐利边缘。图案化回填样品中,弥散畴内的脂质发生异常扩散,其原因是流体畴内存在非理想混合的凝胶相脂质簇;而具有清晰边界的少数畴内未观察到横向扩散。结果表明,尽管多种膜图案化方法对生物物理和生物传感器应用有用,但对所得图案化仿生膜及其未图案化对照进行系统定量表征是必要的。

英文摘要

Biomembranes are complex, heterogeneous, dynamic systems playing essential roles in numerous processes such as cell signaling and membrane trafficking. Model membranes provide simpler platforms for studying biomembrane dynamics under well-controlled environments. Here we present a modified polymer lift-off approach to introduce chemical complexity into biomimetic membranes by constructing domains of one lipid composition (here, didodecylphosphatidylcholine) that are surrounded by a different lipid composition (e.g., dipentadecylphosphatidylcholine), which we refer to as patterned backfilled samples. Fluorescence microscopy and correlation spectroscopy were used to characterize this patterning approach. We observe two types of domain populations: one with diffuse boundaries and a minor fraction with sharp edges. Lipids within the diffuse domains in patterned backfilled samples undergo anomalous diffusion, which results from nonideally mixed clusters of gel phase lipid within the fluid domains. No lateral diffusion was observed within the minor population of domains with well-defined borders. These results suggest that, while membrane patterning by a variety of approaches is useful for biophysical and biosensor applications, a thorough and systematic characterization of the resulting biomimetic membrane, and its unpatterned counterpart, is essential.

关键词

图案化仿生膜支撑脂质双分子层荧光相关光谱脂质横向扩散聚合物lift-off异常扩散