全细胞生物传感器 2008

Microalgal photosynthetic activity measurement system for rapid toxicity assessment.

Ecotoxicology (London, England) Cho CW, Pham TP, Jeon YC, Min J, Jung HY, Lee DS, Yun YS
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组成图示

Microalgal photosynthetic activity me... 传感器构成示意图

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传感器类型

全细胞生物传感器

检测对象

1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐(1-butyl-3-methylimidazolium tetrafluoroborate, [BMIM][BF4])、甲醇(methanol);样品基质:水相样品(富氮BBM培养基/模拟环境水样)

检测原理

该传感器以活体微藻为识别元件。在光照和CO2供给下,Selenastrum capricornutum进行光合作用并释放O2,使反应池中溶解氧(DO)随时间上升。毒物加入后抑制藻类光合活性,降低O2释放,导致DO-时间曲线斜率下降。系统以DO电极实时检测溶解氧,计算机按每分钟数据计算体积产氧速率,再除以细胞浓度得到比产氧速率。光强依赖用光合-光照模型AX=AmIO/(K+IO)-RX拟合,毒物浓度增加使产氧速率降低,进而用logistic浓度-响应模型计算EC50。

检测灵敏度

EC50: [BMIM][BF4] 0.115 mM(光合)/0.126 mM(生长);甲醇 2,089 mM(光合)/759 mM(生长)。原文未报告LOD、线性范围、灵敏度斜率或相关系数。

效应效果

该系统在优化条件(光强1000 μE m−2 s−1、藻浓度0.095 g cell/L、持续N2/CO2通气)下,2 h内完成浓度-响应曲线,较传统96 h藻类生长试验显著缩短。对[BMIM][BF4],光合法EC50为0.115 mM,与生长法0.126 mM接近;对甲醇,光合法EC50为2089 mM,生长法为759 mM,生长法毒性高2.75倍,作者归因于96 h长暴露造成更大损伤。文中未报告实际样品回收率、RSD或选择性矩阵,但给出多次重复的产氧速率标准差(如0.2045±0.0063 mg O2/L/min)。作者认为其可用于有机溶剂、离子液体、重金属、农药等污染物的快速初筛和实时生态毒性监测。

传感器的构成

  • 反应池:Pyrex玻璃双夹套圆柱反应池,工作体积3.58 mL,光程1.8 cm,容纳藻悬液并透光。
  • 恒温层:冷却水夹套与25±2°C水浴,维持光合温度稳定。
  • 光源模块:150 W石英卤素灯、光纤照明器(A3200)与凸透镜,提供平行光并调节入射光强。
  • 光强监测:量子传感器(LI-190A)与光强计(LI-250),测量透射光/入射光子通量密度。
  • 生物识别层:Selenastrum capricornutum ATCC-22662细胞,置于富氮BBM培养基,作为光合活性识别元件。
  • 气体供给层:蠕动泵与99% N2/1% CO2气体混合气,控制初始溶解氧并补充碳源。
  • 搅拌层:0.5 cm磁子与磁力搅拌器,使藻悬液均匀。
  • 信号读出层:Ingold溶解氧电极、溶解氧仪、Hach软件与计算机,实时记录DO变化并计算产氧速率。

中文摘要

本研究构建了一种基于微藻光合活性测量的系统性生物传感器,用于快速评估有毒化合物对Selenastrum capricornutum的毒性。以溶解氧产生速率作为光合响应指标,系统考察了光照强度、藻细胞浓度和初始溶解氧浓度对光合产氧的影响。结果表明,光强增加可提高产氧,直至光饱和;细胞浓度影响体积产氧速率;在持续供给CO2条件下初始溶解氧对光合活性影响有限。以1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐([BMIM][BF4])和甲醇为模型毒物,观察到剂量相关的光合抑制。在优化条件下,该系统仅需约2 h即可预测EC50,而传统基于藻类生长率的藻类毒性试验需96 h。因此,该生物传感器可作为环境毒性快速筛查的简便方法。

英文摘要

A systematic biosensor is constructed for the estimation of toxic compounds based on photosynthetic activity measurement in Selenastrum capricornutum cells. The photosynthetic response was evaluated as a function of light intensity, cell concentration and initial dissolved oxygen. The inhibitory effect of some toxicants (1-butyl-3-methylimidazolium tetrafluoroborate, methanol) on dissolved oxygen production was also determined. In all cases, a toxic response was detected (i.e. a dose-related inhibition of photosynthetic activity was observed). For the present system, a time of only 2 h was needed to predict EC50 values as compared to 96 h for a conventional algal assay based on algal growth rate. Thus, the developed biosensor was proved to be useful as a rapid and simple test method in environmental toxicity assessment.

关键词

微藻生物传感器光合活性溶解氧快速毒性评估Selenastrum capricornutum离子液体